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中医认为黄褐斑为气滞血瘀、肝肾不足、脾胃虚弱等致面生色斑。山茱萸可以疏肝、补肾,是临床上内服和外用两种治法治疗黄褐斑组方中的常用药物。但是,山茱萸治疗黄褐斑的作用机理尚未被阐明,其治疗作用没有得到充分发挥。为了探寻山茱萸提取物治疗黄褐斑的作用机理,使其作用效果能够充分发挥,我们建立了人黑素瘤细胞(A375)与人角质形成细胞(Hacat)共培养模型,用此模型作为评价手段,对山茱萸提取物的药效与作用机理进行研究。通过MTT法测定细胞增殖率,研究提取物对细胞是否有促增殖及毒性作用；NaOH裂解法检测黑素含量,研究提取物是否具有抑制黑素合成的作用；多巴氧化法检测酪氨酸酶(tyrosinase, TYR)活性,研究提取物是否通过抑制黑素合成的关键酶——TYR来抑制黑素的合成；半定量RT-PCR法测定TYR、酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinaserelated protein-1, TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2 (tyrosinaserelated protein-2, TRP-2) mRNA表达,研究提取物是否通过调节这几种关键酶的mRNA表达量来影响黑素的合成。结果,山茱萸提取物作用于A375细胞与Hacat细胞共培养模型后,除山茱萸提取物生药浓度为12g·L-1时对细胞有明显毒性,导致细胞大量死亡外,6g·L-1、3g·L-1、1.5g·L-1、0.75g·L-1四个浓度组对细胞增殖率无显著影响；其中6g·L-1、3g·L-1浓度组对黑素合成有极显著抑制作用(P<0.01),作用效果优于阳性对照药物熊果苷,1.5g·L-1、0.75g·L-1浓度组对黑素合成也有显著抑制作用(P<0.05),作用效果与熊果苷组无显著差异；6g·L-1、3g·L-1、1.5g·L-1、0.75g·L-1四个浓度组对TYR活性均有极显著抑制作用(P<0.01),作用效果与熊果苷类似；6g·L-1浓度组能够使黑素细胞TYR、TRP-1和TRP-2 mRNA表达量分别比阴性对照组下调36.07%、62.34%、44.69%,3g·L-1浓度组能够使黑素细胞TYR、TRP-1和TRP-2 mRNA表达量分别比阴性对照组下调24.1%、53.0%、16.11%。可见,山茱萸提取物能够抑制TYR活性和下调TYR、TRP-1和TRP-2 mRNA的表达量,从而抑制正常人黑素细胞中黑素合成。本研究初步阐明了山茱萸治疗黄褐斑的作用效果及作用机理,为中药祛斑新药及功效型化妆品的开发奠定了基础。