【摘 要】
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自然界中的氨基酸普遍以L型异构体的形式存在,而D型异构体的氨基酸是细菌细胞壁的常见组成成分。食品中D型氨基酸(DAAs)一般是由于食品的生产工艺过程中的一些极端条件造成的,如高温,极端的溶剂p H值,微生物污染等。DAAs不易被人体直接吸收,且其在人体中的异常含量被证明与多种不同的疾病相关,其中D-丙氨酸(D-Ala)被证明与早期胃癌呈特异性相关。同时,有机磷农药(OPs)也因其具有高效的杀虫效率
【基金项目】
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国家重点研发计划(2018YFC1602800)
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自然界中的氨基酸普遍以L型异构体的形式存在,而D型异构体的氨基酸是细菌细胞壁的常见组成成分。食品中D型氨基酸(DAAs)一般是由于食品的生产工艺过程中的一些极端条件造成的,如高温,极端的溶剂p H值,微生物污染等。DAAs不易被人体直接吸收,且其在人体中的异常含量被证明与多种不同的疾病相关,其中D-丙氨酸(D-Ala)被证明与早期胃癌呈特异性相关。同时,有机磷农药(OPs)也因其具有高效的杀虫效率,能够有效的提高农产品产量等特点而被广泛的应用于农业相关的各个领域中。然而,大多数有机磷农药都是有剧毒的,过度或不当的使用不仅会对环境造成污染,也会对人体健康造成危害,严重甚至导致人死亡。因此,快速、灵敏地检测有D-Ala和OPs分别对肿瘤的早期临床诊断和环境保护具有重要意义。在各种检测方法中,大多的传统检测方法过程比较复杂,样品的预处理过程耗时。而生物传感检测方法克服了这些缺点,具有操作简单、快速检测、特异性识别目标物、灵敏度高等优点,可用于体内目标物含量的检测。本文主要构建了两种不同的生物传感器,用于D-Ala和OPs含量的定量检测。本文主要内容如下:(1)基于表面带有负电荷的二氧化锰(Mn O2)纳米片和阳离子聚合物(PFP),构建了一种免标记、高灵敏度的荧光生物传感器用于D-Ala的定量检测。由于荧光内过滤效应(IFE),Mn O2纳米片吸收PFP的荧光,导致体系荧光信号猝灭。在D-Ala和D-α-氨基氧化酶(DAAO)存在的情况下,DAAO酶特异性氧化D-Ala生成过氧化氢(H2O2),H2O2分解Mn O2纳米片使得PFP的荧光恢复。基于此设计了一种用于检测D-Ala的方法,有望用于癌症的早期诊断。该方法的线性范围为1.0 n M~1.0 m M,检测限为0.35 n M。在实际样品(空白血清)中进行加标回收实验,准确率为98%~109%。标准偏差为2.31%~6.2%。(2)我们合成了一种易制备的N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺/钴离子/壳聚糖(ABEI/Co2+/CS)水凝胶材料,并选择金属有机骨架材料(MOF-Pt)作为催化剂,构建了辉光型化学发光(CL)成像传感器用于OPs和D-Ala的检测。底物氯化乙酰胆碱(ATCh)经过乙酰胆碱酯酶(ACh E)和胆碱氧化酶(CHO)的两步催化作用,反应生成了H2O2,H2O2参与鲁米诺体系产生化学发光信号。而OPs的存在会抑制ACh E的活性,减少体系中H2O2的生成,降低了化学发光的信号强度。该方法对毒死蜱的线性范围为0.50 ng/m L~1.0μg/m L,检出限为0.21 ng/m L,并且可以同时对17种有机磷农药进行可视化检测。另一方面,DAAO催化氧化D-Ala生成的H2O2参与到鲁米诺体系产生化学发光。因此,该传感器还可以用于检测血清中的D-Ala,其检测限为0.12μM,因此,该传感器不仅在食品安全方面,而且在临床诊断方面具有广阔的应用前景。
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