【摘 要】
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目的： 研究前B细胞集落促进因子(Pre-B-cell colony-enhancing factor，PBEF)诱导正常人以及重型先天性中性粒细胞减少症患者(severe congenital neutropenia，SCN)的CD34~+细
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目的： 研究前B细胞集落促进因子(Pre-B-cell colony-enhancing factor，PBEF)诱导正常人以及重型先天性中性粒细胞减少症患者(severe congenital neutropenia，SCN)的CD34~+细胞向髓系细胞分化功能。 方法： 1、利用激光辅助骨髓涂片单个细胞采集技术及逆转录实时定量PCR方法检测正常人骨髓中不同分化阶段髓系细胞PBEF表达水平。 2、用逆转录实时定量PCR及ELISA方法检测正常人的髓系细胞经粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)体内、外刺激后PBEF mRNA表达水平、细胞培养液或血浆中PBEF蛋白质水平，同时检测细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+)合成水平的变化，研究G-CSF刺激与PBEF表达、NAD~+合成的关系。 3、用人类重组PBEF体外刺激正常人的CD34~+细胞后，通过光学显微镜观察细胞形态学的变化、流式细胞术检测表面抗原CD11b、CD15的表达以及逆转录实时定量PCR检测细胞C/EBPa、C/EBPe、PU．1和ELA2等基因mRNA的表达，研究PBEF胞外刺激与CD34~+细胞向髓系分化的关系。 4、正常人的CD34~+细胞经由Lentivirus转导PBEF基因后，光学显微镜观察细胞形态学的变化、流式细胞术检测表面抗原CD11b、CD15的表达变化以及逆转录实时定量PCR检测细胞C/EBPa、C/EBPe、PU．1和ELA2等基因mRNA的表达变化，研究PBEF胞内过度表达与CD34~+细胞向髓系分化的关系。 5、用逆转录实时定量PCR、ELISA方法以及共聚焦荧光显微镜断层扫描技术检测经长期G-CSF治疗的SCN病人髓系细胞的PBEF mRNA、胞内蛋白质水平以及血浆蛋白质水平的变化，研究G-CSF治疗后SCN病人髓系细胞“成熟障碍”的纠正与PBEF表达变化的关系
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