随着近代医药事业的发展,药物滥用已经成为极为普遍的现象,大量药物滥用给肝脏代谢带来严重的威胁,致使药物性肝损伤(Drug-induced hepatic injury,DILI)在肝病比例中急剧上升。醋氨酚(Acetaminophen,APAP)诱导的小鼠急性肝损伤模型是由药物引起的肝损伤经典模型之一,在科研领域常被用来作为研究肝损伤机制、降酶退黄以及肝损伤保护药开发的常用模型。进一步研究APAP导致肝损伤的发病机制并开发效果确切的保肝药物是阻碍当代医药卫生事业发展的一个瓶颈。在近代医学,提取自不同植物的黄酮类成分被广泛应用于各种原因导致的肝损伤保护性研究,而早在很久以前的民间验方中就有丁香叶治疗肝病的记载,但至今仍没有关丁香叶黄酮保肝的研究。本研究在课题组前期建立的APAP诱导药物性肝损伤模型的基础上,开展丁香叶黄酮的保肝作用研究。前期研究发现II相药物代谢酶GSTA1可以作为肝损伤模型的早期诊断指标,因此,本研究也以GSTA1作为丁香叶黄酮保肝作用的评价指标之一,为进一步研究药物性肝损伤的致病机制及开发保肝药物奠定基础。在课题组前期药物筛选的基础上,进一步确定丁香叶有效保肝成分。用不同浓度的乙醇溶液对丁香叶回流提取,以血清转氨酶(ALT、AST)活性的变化来初步确定丁香叶有效保肝成分的溶解特性。采用超声波辅助、乙醇溶液回流的提取办法设计单因素实验,观察在单因素情况下各个因素不同水平时对丁香叶黄酮的提取影响。进而通过正交设计法设计四因素三水平的正交提取方案,以丁香叶黄酮为考察指标,分析各个影响因素对丁香叶黄酮提取时作用,确定最优的丁香叶黄酮提取方案。在APAP致小鼠急性肝损伤模型上,将40只小鼠平均、随机分为对照组、模型组、丁香叶黄酮高剂量组(40mg·kg-1)、丁香叶黄酮中剂量组(35mg·kg-1)、丁香叶黄酮低剂量组(30mg·kg-1),通过血清转氨酶(ALT、AST)、肝组织指标(GSH、GSH-Px、MDA、NO、SOD)、II相药物代谢酶GSTA1及肝脏病理组织学变化,综合评价丁香叶黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用,同时观察GSTA1在整个损伤和抗损伤过程中的变化趋势和敏感程度。研究结果表明:(1)以丁香叶黄酮为指标的单因素试验、正交设计试验表明各个因素对丁香叶黄酮提取时影响力的大小:液料比>提取时间>乙醇浓度>提取次数,结合各个因素的最优水平和实际生产情况及正交试验结果确定最优提取方案:在液料比为20:1、提取时间为80min、乙醇浓度为60%、提取次数为1次时丁香叶黄酮的提取效果最好,提取率为127.46mg·g-1。(2)丁香叶黄酮对APAP导致的小鼠急性肝损伤保护性试验表明:和模型组相比,丁香叶黄酮高剂量组小鼠血清转氨酶ALT、AST活性极显著降低(p<0.01),小鼠肝组织中MDA、NO含量极显著降低(p<0.01),小鼠肝组织中GSH、GSH-Px、SOD活性极显著升高(p<0.01),丁香叶黄酮中剂量组血清转氨酶ALT、AST和肝组织指标GSH、GSH-Px、SOD、MDA、NO呈显著(p<0.05)或极显著变化(p<0.01)丁香叶黄酮低剂量组各指标变化均不太明显。(3)丁香叶黄酮对APAP诱导小鼠急性肝损伤模型中II相药物代谢酶GSTA1的变化:与对照组相比,模型组GSTA1含量极显著降低(p<0.01);与模型组相比,丁香叶黄酮高剂量组GSTA1含量极显著升高(p<0.01);丁香叶黄酮中剂量组GSTA1含量显著升高(p<0.05),丁香叶黄酮低剂量组GSTA1含量变化不明显,以上这些变化与肝组织中GSH、GSH-Px、SOD活性变化趋势相一致。(4)肝组织病理学结果显示模型组肝细胞相比对照组脂肪变性、特别是小泡样脂肪变性明显,细胞核裂解、消失,嗜酸性变和炎性细胞浸润明显。丁香叶黄酮高剂量组可见脂肪变性明显减少甚至消失,细胞结构完整、形态恢复,出现双核细胞,说明肝组织损伤得到有效修复。丁香叶黄酮中剂量组肝损伤的修复虽然没有高剂量组明显但和模型组相比也有较大差异。本研究成功复制APAP诱导的小鼠急性肝损伤模型,确定丁香叶醇提物保肝作用优于其水提物,并通过单因素试验和四因素三水平的正交试验优化丁香叶黄酮的提取方案。证明丁香叶黄酮对APAP诱导小鼠急性肝损伤有良好的保护作用。在小鼠急性肝损伤试验中,肝脏中的GSTA1含量呈规律性变化,结合血清转氨酶、肝组织指标及肝组织病理学变化,确定丁香叶黄酮的保肝剂量为40 mg·kg-1。