费菜多糖的提取及分离纯化研究

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本试验以费菜为原料,研究了热水提取法、酶提取法和超声波提取法对费菜多糖(SPS)得率的影响;考察了Sevag法、酶法、三氯乙酸法和Sevag-酶法四种脱蛋白方法对费菜多糖脱蛋白效果的影响;采用DEAE-纤维素柱和凝胶柱层析法分离多糖。试验结果表明:(1)多糖提取方法中,多糖得率顺序为:热水提取法>酶提取法>超声波提取法。热水提取法最优工艺条件为:提取时间95min、料液比1:14g/mL、提取温度95℃,多糖得率为(2.08±0.22)%。超声波法提取多糖的最优工艺条件为:提取时间23min,提取温度52℃,提取功率128W,实际测得多糖得率为(0.24±0.01)%;酶法提取多糖的优化工艺条件为:pH值5.9,料液比1:20g/mL,和提取时间91min进行多糖提取,多糖得率为(0.38±0.01)%。(2)各脱蛋白方法脱蛋白效果顺序为:三氯乙酸法>Sevag-酶结合法>Sevag法>酶法。Sevag法脱蛋白优化工艺条件为:振荡时间25min,氯仿:正丁醇(v/v)3:1,料液比(v/v)2:1,振荡次数4次,蛋白质脱除率和多糖损失率分别为(61.28±0.25)%和(29.16±0.19)%。酶法多糖脱蛋白工艺条件优化:反应温度为50℃,酶用量为0.5%,反应时间为90min,pH值为5.2,蛋白质脱除率为(55.65±0.41)%和多糖损失率为(35.72±0.02)%;三氯乙酸法脱蛋白最优工艺条件:三氯乙酸浓度为10%,振荡次数为4次,振荡时间为10min,蛋白质脱除率和多糖损失率分别为(82.84±0.11)%和(32.64±0.08)%;Sevag-酶结合法蛋白质脱除率为74.99%,多糖损失率为45.35%。(3)采用DEAE-纤维素柱层析得到3个多糖组分(SPS1、SPS2、SPS3),采用葡聚糖凝胶柱层析对组分SPS1进行进一步分离纯化得到2个组分(SPS1-1、SPS1-2)。
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