论文部分内容阅读
通过电镜观察、血清交叉中和试验和回归动物实验等初步鉴定为IBV.经与标准M<,41>株、T株进行鸡胚血清交叉中和实验,证实山东传支A株与标准M<,41>株具有抗原交叉性,与标准T株有差异,并在实验室对山东传支A株进行了理化特性研究.参照国外已发表的M<,41>高可变区S<,1>序列设计一对引物,跨度为1.7kb左右.采用差速离心法浓缩病理,提取病理RNA,经RT-PCR扩增,得到与设计同样大小的PCRDNA片段,将PCR产物纯化,与质粒载体连接,重组质粒转入大肠杆菌JM109,用含氨苄青霉素的培养基础培养后,利用互补现象,进行蓝、白斑筛选、获取阳性克隆.取白斑在LB培养基进行增菌培养,利用小量碱提取法提取大肠杆菌质粒,利用EcoRI进行酶分析,鉴定阳性克隆.取阳性制质粒DNA进行测序,利用Omiga2.0、Dnasis等分子生物学软件进行分析,并与标准M<,41>株、T株等进行序列比较分析.