论文部分内容阅读
目的:通过体外实验观察人参皂苷Rg3及其与奥沙利铂和索拉非尼联合对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响,并探讨相关机制,为中药与化疗药物及分子靶向药物的联合应用提供理论依据及实验基础。方法:选择合适的人参皂苷Rg3、奥沙利铂和索拉非尼单药浓度,将单药、两药联合及三药联合分别作用于人肝癌细胞SMMC-7721,采用多种实验方法观察其对细胞株的影响:(1)采用MTT法观察对SMMC-7721细胞增殖的影响;(2)流式细胞术观察SMMC-7721细胞早期凋亡情况;(3)原位末端标记法(TUNEL)检测SMMC-7721细胞的中晚期凋亡情况;(4)实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)、免疫印迹法(Western blotting)检测Bax、 Bcl-2表达情况;(5)采用免疫荧光细胞化学法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表达情况。结果:(1)人参皂苷Rg3、奥沙利铂和索拉非尼单药或联合均具有抑制增殖作用,其中三药对比两药、两药对比单药作用更明显(P<0.01),药物之间联合表现出良好的相加作用;(2)流式细胞术检测发现,各实验组均具有诱导凋亡的作用,三药组比两药组、两药组比单药组具有显著诱导凋亡作用(P<0.01);(3)原位末端标记法显示,阴性对照组细胞几乎无凋亡,细胞核着淡紫色,阳性对照组细胞核几乎全着深褐色,实验组细胞核固缩着深褐色,单药及联合用药后凋亡指数显著升高(P<0.01);(4) RT-qPCR法检测发现:除人参皂苷Rg3+索拉非尼两药组与人参皂苷Rg3单药组Bax基因表达无差异外,其余各实验组Bax基因表达均增强,且两药组较单药组、三药组较两药组Bax基因表达均明显增强(P<0.01或P<0.05); Bcl-2表达在单药组、两药组及三药组中具有降低趋势;Bax/Bcl-2基因比值增高,两药组对比单药组、三药组对比两药组均明显增高(P<0.01)。(5)免疫荧光细胞化学法显示,Bax、Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2比值增高,两药组对比单药组、三药组对比两药组均明显增高(P<0.01或P<0.05); Bcl-2蛋白表达减弱,两药组对比单药组、三药组对比两药组均明显降低(P<0.01或P<0.05)。(6) Western bloting实验显示:Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2比值有增高趋势,两药组对比单药组、三药组对比两药组均具有增高趋势,Bcl-2蛋白表达无明显趋势。结论:人参皂苷Rg3、奥沙利铂和索拉非尼单药或联合均具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖以及诱导其凋亡的作用,其诱导细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax、Caspase-3表达以及Bax/Bcl-2比值,下调Bcl-2表达而实现的。三药联合及两药联合作用优于单药,三药联合优于两药联合,各药物之间的联合表现出了良好的相加作用。本实验结果为临床治疗肝癌进行合理的药物组合,制定优化的联合方案提供了实验依据,对指导临床用药、提高肝癌临床疗效具有重要的意义。