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蛋壳颜色是鸭蛋外部形态的一个质量性状,是衡量蛋品质的一项指标,也是蛋鸭重要的经济性状。本研究以雷州黑鸭为试验素材,对300日龄产的青壳与白壳蛋的蛋品质和营养成分进行测定;测定其蛋壳色素含量并分析其与蛋壳颜色的相关性;运用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)测定青壳候选基因LOC101800257在雷州黑鸭子宫、输卵管和肝脏中及其不同生长阶段的表达量;通过采用测序和PCR-SSCP法检测LOC101800257基因的单核苷酸多态性,探讨SNP位点的多态性及其与青壳性状的相关性,旨在揭示LOC101800257基因对雷州黑鸭青壳蛋形成的调控,为雷州黑鸭青壳蛋品系的选育提供分子育种材料。本研究结果表明: (1)雷州黑鸭白壳蛋蛋壳颜色是62.02,与青壳蛋的51.58差异显著(P<0.05),青壳蛋的蛋黄颜色与胆固醇含量都显著高于白壳蛋,而其他蛋品质指标和营养成分含量差异不显著,同时蛋壳颜色与蛋黄颜色、蛋壳厚度和蛋壳强度之间存在显著相关性。 (2)雷州黑鸭青壳蛋的胆绿素含量为0.0253mg/g ,显著高于其原卟啉含量(0.0069mg/g),同时与白壳蛋的胆绿素含量(0.0083mg/g)存在显著差异。蛋壳颜色与蛋壳色素总量和胆绿素含量之间存在显著相关性(P<0.05)。 (3)RT-PCR结果显示:LOC101800257基因在雷州黑鸭子宫和输卵管的相对表达量很少,主要在肝脏中进行表达。而在肝脏的表达中白壳蛋鸭与青壳蛋鸭的相对表达量存在显著差异(P<0.05)。在不同生长阶段雷州黑鸭的肝脏中,LOC101800257基因的表达呈现先减后增的变化趋势,其中在27周龄时相对表达量最高(0.385),43周龄时表达量最低(0.022)。 (4)通过设计10对特异性引物克隆雷州黑鸭LOC101800257基因的部分外显子和内含子发现,在基因第13815bp和15325bp处各发现一个新的单核苷酸多态性位点。前者位于第9号外显子上,由于碱基A→G的突变导致了原编码氨基酸异亮氨酸(ILe)突变成缬氨酸(Val),属于错义突变,在cDNA水平上命名为c.1406A>G。后者位于第11号内含子上,由碱基A→G发生突变,由于突变位点在非编码区,因此在cDNA水平上命名为c.1642+16A>G。位点c.1406A>G中等位基因A和G的基因频率分别为0.554和0.446,杂合型AG为优势基因型;位点c.1642+16A>G中等位基因A和G的基因频率分别为0.683和0.317,野生型AA为优势基因型。在统计的雷州黑鸭群体中,这两个SNP位点都处在Hardy-Weinberg非平衡状态(P<0.01)。位点c.1406A>G的期望杂合度、有效等位基因数和 PIC 分别为 0.494、1.977 和 0.372 ,而位点c.1642+16A>G的期望杂合度、有效等位基因数和PIC分别为0.433、1.763和0.339,两个位点都表现出丰富的遗传多态性。两个位点c.1406A>G和c.1642+16A>G的基因型组合GGGG与青壳性状存在显著关联(P<0.05),可以作为一个分子标记用于蛋壳颜色的选育。