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目的:烟雾吸入性损伤是影响烧伤预后的重要因素之一,但其发生发展的分子机制尚不十分清楚。业已证实,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNAs）在肿瘤、脓毒血症诱导的急性肺损伤等多种疾病中发挥重要作用。本研究第一部分通过芯片检测和文献复习提示,lncRNA NONMMUT083950（简称3950）可能作为竞争性内源RNA（competing endogenous RNA,ce RNA）介导烟雾吸入性损伤中炎症及凋亡反应;接着,第二部分拟从体外实验,着重考察lncRNA 3950在烟雾吸入性损伤中的作用及分子机制,为后期临床应用提供理论和实验基础。方法:1.基于前期对烟雾吸入性损伤实验研究的工作基础,利用自制的烟雾吸入性损伤仪,建立小鼠烟雾吸入性损伤模型,并观察肺组织大体形态,苏木精-伊红染色检测肺组织病理变化,蛋白质印迹法（Western blot）检测肺组织中炎症因子及凋亡反应相关蛋白的表达水平。2.利用芯片技术对烟雾吸入性损伤小鼠和对照组小鼠肺组织进行检测,并选取与差异m RNA呈现显著正相关共表达的差异lncRNA作为ce RNA分析的目标lncRNA,利用数据库mi RBase22,对目标lncRNA和差异m RNA进行mi RNA-lncRNA和mi RNA-m RNA的靶标预测,利用mi RNA作为桥梁建立lncRNA-mi RNA-m RNA的三元调控网络并绘制ce RNA网络图。3.为验证芯片结果,利用即时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测小鼠肺组织中lncRNA3950、mi R-149-3p、CXCL14的表达情况,Western blot检测小鼠肺组织中CXCL14蛋白的表达水平。4.利用自制的烟雾吸入性损伤仪,建立烟雾致肺上皮细胞（MLE-12细胞及TC-1细胞）损伤模型,并利用划痕实验检测细胞迁移修复能力,Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测细胞活力情况,乳酸脱氢酶（LDH）比色法测试盒检测细胞培养上清中LDH的含量,酶联免疫吸附测定实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞培养上清中炎性因子的表达情况,Western blot检测细胞凋亡反应相关蛋白的表达水平。5.烟雾处理后,利用q RT-PCR检测细胞中lncRNA3950、mi R-149-3p、CXCL14的表达情况,Western blot检测细胞中CXCL14蛋白的表达情况。6.利用荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）检测lncRNA3950在MLE-12细胞及TC-1细胞中亚细胞定位,双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA3950与mi R-149-3p相互作用、mi R-149-3p与CXCL14相互作用。7.在烟雾致肺上皮细胞损伤基础上,通过细胞转染,对lncRNA3950、mi R-149-3p、CXCL14进行沉默或过表达等,ELISA检测细胞培养上清中炎性因子的表达情况,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白及CXCL14的表达水平,并利用流式细胞术检测细胞凋亡变化,q RT-PCR检测细胞中lncR3950、mi R-149-3p、CXCL14的表达情况。结果:1.烟雾吸入性损伤小鼠肺组织包膜紧张,肿胀明显,表面可见散在出血点,甚至局部片状出血,边缘变钝;肺组织病理检查结果显示:肺泡腔内可见程度不等的炎性细胞浸润及出血表现,部分视野可见肺泡腔萎陷或囊状扩张,部分肺泡间隔增厚,局部透明膜形成;与Control组比较,Injury组小鼠肺组织中IL-1β、TNF-α、Bax、caspase-7和caspase-3的表达水平升高,而Bcl-2的表达水平降低;差异均具有统计学意义。2.与Control组比较,Injury组小鼠肺组织差异表达的lncRNAs 577个,其中,322个下调,255上调;差异表达的m RNAs 517个,其中,106个下调,411上调;并构建了ce RNA网络;lncRNA3950、CXCL14均表达上调,mi R-149-3p表达下调;差异均具有统计学意义。3.与Control组比较,Injury组细胞迁移修复能力降低;细胞培养上清中LDH及炎性因子TNF-α、IL-1β的含量增多;细胞活力降低;凋亡相关蛋白Bax、caspase-7和caspase-3的表达水平升高,而Bcl-2的表达水平降低;lncRNA3950、CXCL14表达上调,mi R-149-3p表达下调;差异均具有统计学意义。4.在烟雾致肺上皮细胞损伤的基础上,沉默lncRNA3950,与Injury+si-NC组比较,Injury+si-3950组细胞活力改善;细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的含量均减少;细胞凋亡率降低;细胞中Bax、caspase-7和caspase-3的表达水平降低,而Bcl-2的表达水平升高;mi R-149-3p的表达增加而CXCL14的表达减少;差异均具有统计学意义。5.FISH检测结果显示:lncRNA 3950在MLE-12细胞及TC-1细胞中主要定位在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验结果显示:lncRNA3950直接结合吸附mi R-149-3p,mi R-149-3p直接结合吸附CXCL14。6.在烟雾致肺上皮细胞损伤的基础上,过表达mi R-149-3p,与Injury+mi R-NC组比较,Injury+mi R-149-3p组细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的含量均减少,细胞中Bax、caspase-7和caspase-3的表达水平降低,而Bcl-2的表达水平升高,CXCL14的表达减少;沉默CXCL14,与Injury+si-NC组比较,Injury+si-CXCL14组细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的含量均减少,细胞中Bax、caspase-7和caspase-3的表达水平均降低,而Bcl-2的表达水平升高;lncRNA3950的表达降低;差异均具有统计学意义。7.在烟雾致肺上皮细胞损伤的基础上,沉默mi R-149-3p或者过表达CXCL14都能够逆转沉默lncRNA3950所带来的炎症因子、凋亡相关蛋白表达降低的效果。结论:1.烟雾吸入性损伤小鼠肺组织中lncRNAs及m RNAs表达谱与对照组不同,其中,差异表达的lncRNAs 577个,差异表达的m RNAs 517个;2.lncRNA 3950作为ce RNA,通过海绵吸附mi R-149-3p,促进下游基因CXCL14的表达,从而介导烟雾吸入性损伤中炎症及凋亡反应;3.沉默lncRNA 3950能有效减轻伤后细胞炎性反应,减少细胞凋亡,改善细胞活力;为后期临床靶向治疗烟雾吸入性损伤提供了理论和实验基础。