轮状病毒（Rotavirus,RV）是全世界婴幼儿急性胃肠炎最常见的病原,每年导致约1.25亿的婴幼儿发生胃肠炎腹泻,大约90万5岁以下婴幼儿因它死亡,严重影响了婴幼儿的身体健康并给全球带来了巨大的疾病和社会负担。RV在分类上属呼肠孤病毒科轮状病毒属,由于RV腹泻至今尚无特效药物可以治疗,疫苗是目前证实唯一和最有效的预防方法。我所在实验室主要致力于轮状病毒疫苗的研制,利用反向遗传学方法构建A组轮状病毒重配株。2006年Komoto建立了轮状病毒的反向遗传系统,并利用该系统在VP4基因中引入突变,该系统需要辅助轮状病毒提供复制酶和其它基因,及抗辅助病毒的中和性单克隆抗体作为筛选压力抑制野生型辅助病毒生长。本论文的主要内容是获得作为筛选压力的抗辅助病毒的单克隆抗体,并对获得的单克隆抗体的特性进行了初步研究。具体研究内容如下:第一章文献综述全面概述了轮状病毒的形态结构、理化性质、基因组结构以及其编码蛋白、A组轮状病毒的G、P血清型及流行病学、轮状病毒疫苗研究现状;重点论述了RNA病毒特别是轮状病毒的反向遗传学研究现状以及本实验室的研究思路。第二章羊轮状病毒LLR的增殖和纯化利用MA104细胞分离出从武汉市疾病预防与控制中心购买的中国生物技术集团公司兰州生物制品研究所生产的人用口服轮状病毒活疫苗罗特威羊轮状病毒LLR（G10P[12]）,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测、A组轮状病毒金标免疫层析试剂盒检测为阳性。采用常规方法进行大量增殖,TCID₅₀方法测定病毒的滴度,结合蔗糖密度梯度离心和凝胶过滤层析纯化病毒。第三章羊轮状病毒LLR VP4单克隆抗体的制备及特性研究取纯化的羊轮状病毒LLR悬液250μL（蛋白浓度175μg）与等量弗氏完全佐剂混合,完全乳化后,腹腔注射免疫6-8周龄Balb/c雌鼠,此后每周等量抗原加弗氏不完全佐剂用腹腔注射加强免疫一次,第4次在细胞融合前3天用不加佐剂的等量纯抗原经尾静脉加强免疫一次。最后取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经PEG融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化,最终获得了四株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1B1、1B8、1F11和1G10。对获得的四株单克隆抗体进行分析,结果显示:4株杂交瘤细胞中,1-B1、1-B8、1-G10产生的抗体为IgM型,而1-F11产生的抗体为IgG1亚类;杂交瘤细胞1-B1、1-B8、1-F11和1-G10腹水抗体效价分别为1.0×10⁴、3.2×10⁴、1.6×10⁴和1.6×10⁴;1-B1、1-B8、1-F11和1-G10腹水单抗的中和效价分别为1:2 048、1:1 024、1:512、1:512;经Western-blot鉴定分析,四株单克隆抗体都是轮状病毒主要外衣壳蛋白VP4特异性的。