论文部分内容阅读
为了阐明Rboh基因家族在水稻免疫应答和生长发育中的功能，利用生物信息学方法从最新的水稻基因组数据库(RGAP6.1)中检索到了7个与哺乳动物NADPH氧化酶催化亚基g91phox同源的OsRboh基因，分别为OsRbohA、OsRbohB、OsRbohC、OsRbohD、OsRbohE、OsRbohF和OsRbohG。OsRbohA-G与gp91phox一样具备6个跨膜结构域(TMDⅠ-TMDⅥ)，FAD结合结构域和NADPH结合结构域。此外与gp91phox不同的是，在OsRbohA-G的N末端都含有2个可以结合Ca2+的EF手性模体(EF hand)。并对其进行组织特异性表达分析，发现OsRbohD只在穗和愈伤组织中表达，且OsRbohE和OsRbohF仅在愈伤组织中特异表达，而其他基因为组成型表达。利用Real-time PCR对分别在水杨酸SA、茉莉酸甲酯MeJA和水稻黄单胞菌PX099致病菌株处理下的OsRboh基因家族的表达水平进行了分析，同时对处理后的叶片H2O2含量进行测定。结果表明，SA可以提高OsRbohA、OsRbohB、OsRbohC和OsRbohD的表达水平，MeJA可以提高OsRbohA、OsRbohB、OsRbohC和OsRbohG的表达水平，接种水稻黄单胞菌致病菌株PXO99可以提高OsRbohA和OsRbohB的表达水平。然而三者在诱导OsRboh基因家族成员的表达时序性和表达程度存在着差异。此外，3种不同处理都能导致不同程度的H2O2积累。结果显示，OsRboh基因家族各基因在水稻免疫应答中可能扮演不同角色，发挥不同作用。此外，通过基因克隆和转基因技术，得到了OsRbohA、OsRbohB、OsRbohC、OsRbohD和OsRbDhG的RNAi沉默表达转基因系和OsRbohB的过量表达转基因系。