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本实验首先利用以前构建好的猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)E2基因疫苗质粒pcDSW免疫CSFV敏感猪，然后用复壮的CSFV石门血毒对免疫猪进行攻击。结果表明：pcDSW免疫猪后可诱导产生CSFV特异性的抗体反应，抵抗强毒的攻击，保护率不低于HCLV所提供的保护水平。pcDSW免疫猪攻毒后，免疫器官无明显病理变化，对照pcDNA3猪攻毒后，发生典型的猪瘟病理特征，免疫器官中可检出病毒抗原，淋巴细胞坏死。可从部分免疫猪血液中检出病毒(3／6)，但免疫猪无猪瘟临床症状和病理变化。为提高免疫效果，探讨了细胞因子对DNA疫苗的免疫促进作用。先构建了猪瘟病毒E2基因与鼠IL-2，IL-3 cDNA的双表达真核载体pIRSTIL-2和pIRSTIL-3。小鼠免疫实验表明IL-2和IL-3对DNA疫苗的免疫应答水平具有明显的提高作用，并且两者间具有一定的协同作用。因此，本实验进一步克隆了猪的IL-2和Il-6的cDNA，并构建了共同表达CSFV E2基因与猪IL-2的双表达质粒pIRE2PIL2。以pIRE2PIL2免疫新生仔猪，然后以CSFV石门血毒进行攻击。虽然结果表明pIRE2PIL2所提供的保护率与不含猪IL-2的E2基因真核表达质粒pIRE2的相似，但实验观察到pIRE2PIL2免疫猪在攻毒后白细胞数不下降，而pIRE2免疫猪白细胞数明显下降，表明IL-2对DNA疫苗可提供一定的免疫增强作用。本实验还尝试了DNA疫苗的应用试验。用CSFV E2基因表达质粒pIRE2肌肉接种免疫小鼠，按常规方法通过融合、筛选、克隆。结果获得了2株分泌抗CSFV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(GE、GB)。兔体中和实验证明2株McAb均可中和猪瘟兔化弱毒(HCLV)的感染性，中和活性不低于1：200。2株McAb可与从全国不同地方收集的9个CSFV野毒株发生反应。GB与BVDV有交叉反应，说明它针对瘟病毒的共同抗原表位，GE与BVDV没有交叉反应，说明它为CSFV特异性McAb。为探讨提高DNA疫苗免疫应答水平的方法，本实验还进行了以下两个方面的工作：(1)．通过提取HCLV感染兔组织总RNA，然后用RT-PCR的方法，最少获得了HCLV基因组12.3kb中5′端9.5kb的序列，它包含了HCLV全部的结构蛋白编码区和大部分非结构蛋白编码区。这为构建CSFV多个抗原基因甚至全基因组的DNA疫苗打下基础(2)．本课题设计了—18氨基酸肽(ACDCRGDCFCGPKKKRKV，命名为RNLS)，该肽含有—RGD基序和来源于SV40大T-Ag的核内化信号序列(NLS)。RNLS与DNA形成的复合物转染细胞时，可借助于广泛存在于各种细胞膜的RGD受体将DNA导入细胞内，然后通过NLS的作用携带DNA穿过核孔进入到细胞核。仞步研究证实，RNLS有较好的转染效果，5：1—20：1比例的肽／DNA(1μg)复合物均可转染成功，与脂质体Lipofectin相比，转染率最高可达70％。