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目的：探究用永分化的人角质形成细胞（HaCaT）和黑素细胞（Melanocytes,MCs）混合培养接种于去表皮的真皮(De-epidermized dermis,DED)，体外构建含黑素的组织工程皮肤。 方法：1．采用两步酶消化法处理健康小儿包皮，获得表皮细胞悬液，用改良的M254黑素细胞培养基培养MCs。2．将中国医科大学馈赠的HaCaT细胞复苏。3.分别将HaCaT、MCs传至第3代。4．将培养第3代的HaCaT、MCs细胞以10：1比例制作细胞爬片，1天后进行 Masson-Fontana染色。5.制备人去表皮的真皮(DED)，分别将培养第3代的HaCaT、MCs制成细胞悬液，按照10：1的比例接种于DED表面，采用液下培养3天后，改为空气一液面培养相结合的方式进行培养，每3天换液一次，2周后取培养的组织工程皮肤分别做 HE染色、硫酸亚铁染色、HMB45和角蛋白免疫组化鉴定并取先前做过的KCs和MCs共培养的工程皮肤做比较。 结果：1. HaCaT、 MCs混合培养于爬片1天后，于倒置显微镜下观察到HaCaT呈铺路石状生长，其间散布MCs，MCs树突延伸到HaCaT细胞间。2.两种细胞混合接种于DED，15天后HE染色显示在DED上有3～6层表皮细胞,并可见角质层,角蛋白免疫组化染色阳性，硫酸亚铁染色显示全角质层可见散在黑素着色。 结论：MCs、HaCaT混合接种于细胞爬片中可构建MCs和HaCaT接触生长的单细胞层，将MCs、HaCaT接种于DED可构建含有黑素成分的组织工程皮肤。