禽流感是由A型流感病毒引起家禽和野禽的一种从呼吸症状到严重性败血症等多症状的综合症,也能偶见感染人类的报道。根据病原体类型的不同,可以将禽流感病毒分为三类:高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。本研究以环介导等温扩增技术为基础,针对近几年我国广泛流行的H5N1亚型禽流感病毒HA基因的保守区域设计引物,建立检测H5禽流感RT-LAMP方法。以水禽咽喉拭子样本的cDNA为模板,利用Bst酶在63℃恒温水浴锅中进行30分钟扩增即可。该方法只能针对H5亚型的禽流感病毒(H5N1和H5N2)发生特异性扩增,而对H7、H9亚型的禽流感病毒、小鹅瘟病毒和鸭瘟病毒等不发生扩增,表现出很强的特异性。就检测敏感度而言,该方法检测体外转录的HA基因达到10copies/μl,与定量PCR方法敏感性相当。该方法无需特殊昂贵的仪器,操作简单、快速,适合于基层实验室用于水禽样本H5亚型禽流感带毒情况的普查。本研究对2010年至2012年间西南地区疑似鸭传染性浆膜炎的发病水禽样本进行采集,并运用世界卫生组织推荐的RT-PCR方法进行比较检测。对5个临床核酸样品的HA基因序列分析表明,5条序列受体蛋白结合位点均为典型的禽源受体位点QSG,氨基酸裂解位点分别为PQRERRRKR/GLF和PLREKRRRKR/G LF,均为5个以上的碱性氨基酸排列,具有4个与人源H5N1亚型禽流感病毒相同的糖基化位点,分别为27、209、302、和499位。氨基酸相似性分析结果表明,均与其他18个参考序列具有很高的相似性。近一步的进化分析表明五个阳性样本具有很近的亲缘关系,均隶属于clade2。