拟南芥CBF 3和rd29A基因启动子的克隆及活性检测

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CBF 3基因启动子和rd29A基因启动子是两个逆境诱导型启动子,拟南芥CBF3和rd29A基因的表达受到干旱、低温和高盐的诱导,其启动子是植物抗逆性基因工程中理想的逆境诱导型启动子。CBF 3基因是在拟南芥中克隆并鉴定的转录激活因子,特异结合在DNA顺式调控元件DRE上,DRE包含COR基因簇,通过CBF 3的不断超量表达来诱导COR基因表达。rd29A基因是拟南芥在干旱、低温及高盐胁迫下应答的基因,rd29A的启动子区域含有DRE核心序列和ABRE顺式作用元件。CBF 3基因和rd29A基因能在干旱、低温及高盐胁迫条件下调控COR基因表达,并在上述逆境胁迫信号传递中起重要作用。为了进一步了解CBF 3启动子和rd29A启动子的功能,本研究以拟南芥基因组DNA为模板,通过特异PCR扩增,克隆冷诱导表达启动子CBF 3和rd29A。用CBF 3启动子和rd29A启动子分别替换pBI121载体上的35S启动子构建新的载体pBC-GUS和pBA-GUS。经酶切验证正确后,采用农杆菌花序浸蘸的方法把它们转化到野生型拟南芥中,同时采用农杆菌介导的方法把它们转化到野生型烟草中。通过抗生素筛选和PCR检测初步证明得到转基因植株。转基因烟草的GUS组织化学染色及PCR分析结果表明,在低温诱导下,CBF 3启动子可启动GUS基因表达。
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