目的:　　原发性肾病综合征(PNS)是最常见的儿童肾脏疾病之一，其临床症状是肾病范围的蛋白尿、低白蛋白血症、水肿和高胆固醇血症。　　白介素17（Interleukin-17，IL-17），是一种促炎的细胞因子，由活化的CD4+T细胞亚群（常称为Th17）产生。IL-17家族由6种家庭成员构成，它们分别是IL-17(又称IL-17A)，IL-17B，IL-17C，IL-17D，IL-17E(又称IL-25)，和IL-17F。IL-17受体家族由5种成员组成，它们分别是IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE。近年来国内外对IL-17在肾脏疾病方面的研究集中在狼疮性肾炎、糖尿病肾病、肾小球肾炎、肾损伤和肾移植排斥损伤。有关IL-17在肾病综合征的研究报道很少。　　PNS的主要损伤是肾脏丢失蛋白质，PNS范围的蛋白尿是由于肾小球滤过膜通透性的损害，和肾小管重吸收障碍所致。肾小球滤过屏障是由三层组成:内皮细胞层，肾小球基底膜(glomerular basement membrane，GBM)，和足细胞足突层。肾小球疾病的特点大都是裂孔隔膜(slit diaphragm，SD)分子结构的改变，和足突结构重组（融合和消失）。足突消失和蛋白尿的最主要原因是GBM或足细胞-GBM之间相互作用的异常，SD区域损害，以及肌动蛋白细胞骨架和相关蛋白的改变。足细胞结构的改变引发足细胞损伤，从而导致足突的丢失。足细胞缺乏是肾小球硬化的开始。　　丝裂原活化激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是细胞功能活动的应激通路，对于细胞的生长、发育、分裂、凋亡等起到重要作用。哺乳细胞的MAPK通路有四种:细胞内信号调节酶(Erk)-1和-2，c-Jun N末端酶(JNK)，p38MAPK和细胞内单个调节酶-5（Erk5/BMK1）。研究已证实，MAPK通路在急慢性炎症中起到重要的作用。P38MAPK在抗肾小球基底膜肾炎中的表达增加，并且影响炎症细胞的聚集和肾小管的损伤。　　本研究通过阿霉素(Adriamycin，ADR)诱导建立的小鼠肾病综合征模型（微小病变型），观察IL-17在肾脏组织和外周血水平的变化，以及IL-17相关趋化因子CCR6、CCL20，中性粒细胞相关趋化因子CXCL1、CXCL2、IL-8，Th1相关趋化因子CXCL9、CXCL10、IL-12、IFN-γ，三组因子在肾组织中的表达变化。同时对模型小鼠应用中和IL-17抗体进行干预，观察其炎症水平和肾脏功能情况的变化。从而探讨IL-17在PNS中的促炎机制。此外，本研究亦通过体外培养小鼠肾足细胞，研究IL-17在肾足细胞炎症中的分子作用机制，以及与MAPK信号路径的相关性。进一步探讨IL-17及其相关趋化因子在儿童PNS发病及发展中的作用，为临床上进一步防治儿童PNS提供新的理论依据。　　方法:　　1.动物实验:随机将Balb/c小鼠分为三组，正常对照组，模型组（阿霉素肾病），IL-17中和抗体组，每组共10只小鼠。给予小鼠尾静脉注射阿霉素诱导阿霉素肾病模型（微小病变型），1周后其中1组模型小鼠给予腹腔注射IL-17中和抗体，2周后将全部小鼠处死，留取尿液、血液和肾组织。24小时尿蛋白定量采取邻苯三酚红比色法测试，ELISA检测血清IL-17、Cys C、Kim-1、NGAL的浓度。应用HE染色、免疫组化DAB染色制作肾组织病理切片，观察肾脏组织中IL-17的表达。IL-17相关趋化因子CCR6、CCL20的mRNA表达，中性粒细胞相关趋化因子CXCL1、CXCL2、IL-8的mRNA表达，Th1相关趋化因子CXCL9、CXCL10、IL-12、IFN-γ的mRNA表达，均使用荧光定量PCR进行检测。　　2.肾足细胞培养:小鼠肾足细胞加入含10％胚胎小牛血清的1640倍的培养液，和10U/mlγ干扰素后，然后放入33℃孵育箱，细胞传代培养;然后转入无干扰素、37℃培养孵箱，使细胞分化2周后。足细胞种植于平皿，在无血清的清洁培养液中培养24小时，应用重组的小鼠IL-17蛋白100ng/ml，刺激小鼠肾足细胞共同孵养24小时。随后应用Erk、p38抑制剂10umol/l分别与IL-17刺激的足细胞孵育24小时后;收集细胞，Western Blot检测:小鼠肾足细胞中p38、Erk及p-p38、p-Erk的蛋白水平。在加用p38和Erk抑制剂后，中性粒细胞相关趋化因子IL-8、Th1相关趋化因子IL-12的mRNA表达，采取荧光定量PCR测定。　　结果:　　1.光镜的观察结果　　同对照组比较，模型组有球囊部分粘连，系膜细胞增生，基质增多，肾小管腔部分出现蛋白管型，肾间质炎症细胞浸润;中和IL-17抗体组比模型组轻。　　2.电镜的观察结果　　模型组与对照组比较，肾小球形态结构轻微异常，足突普遍融合。IL-17中和抗体组病变较轻。　　3.各组小鼠肾组织IL-17蛋白表达　　DAB染色显示，IL-17的阳性细胞多为胞质染色阳性，正常肾组织中有少量IL-17的表达，主要集中在肾小管，而肾小球中无表达;模型组中，肾小管上IL-17表达显著，它在肾小球中有少量表达;IL-17中和抗体组较模型组轻。同对照组比较，阿霉素肾病组、IL-17中和抗体组细胞的阳性着色度明显增强，P＜0.05。模型组比IL-17中和抗体组细胞阳性着色度明显增高，P＜0.05。　　4.各组小鼠肾组织IL-17相关趋化因子CCR6、CCL20的mRNA表达　　与正常对照组对比，模型组、IL-17中和抗体组CCR6、CCL20的mRNA表达均升高，P＜0.05。模型组的CCR6、CCL20mRNA表达比IL-17中和抗体组增强，P＜0.05。　　5.各组小鼠肾组织中性粒细胞相关趋化因子CXCL1、CXCL2、IL-8的mRNA表达　　与正常对照组比较，模型组、IL-17中和抗体组CXCL1、CXCL2、IL-8的mRNA表达均升高，P＜0.05。模型组比IL-17中和抗体组CXCL1、CXCL2、IL-8的mRNA表达升高，P＜0.05。　　6.各组小鼠肾组织Th1相关趋化因子CXCL9、CXCL10、IL-12、IFN-γ的mRNA表达　　与正常对照组比较，模型组、IL-17中和抗体组CXCL9、CXCL10、IL-12、IFN-γ的表达下降，P＜0.05。模型组比IL-17中和抗体组CXCL9、CXCL10、IL-12、IFN-γ的表达降低，P＜0.05。　　7.各组小鼠血清IL-17水平的变化　　与正常对照组比较，模型组、IL-17中和抗体组的IL-17水平升高，P＜0.05。模型组比IL-17中和抗体组的IL-17水平升高，P＜0.05。　　8.各组小鼠肾功能指标血清KIM-1、NGAL、Csy C水平的变化　　与正常对照组比较，模型组、IL-17中和抗体组的KIM-1、NGAL、Csy C血清水平均升高，P＜0.05。模型组比IL-17中和抗体组的KIM-1、NGAL、Csy C水平升高，P＜0.05。　　9.小鼠肾足细胞中p38、Erk及p-p38、p-Erk的蛋白水平　　与正常组比较，IL-17刺激组Erk、p-Erk、p38、p-p38的蛋白表达水平升高，其中p38、p-p38的蛋白水平升高最明显。　　10.应用p38抑制剂和Erk抑制剂后，中性粒细胞相关趋化因子IL-8 mRNA表达　　与正常组对比，IL-17刺激组、p38抑制剂组、Erk抑制剂组的IL-8 mRNA表达均明显升高，P＜0.05。与IL-17刺激组比较，p38抑制剂组、Erk抑制剂组IL-8mRNA表达均下降，P＜0.05。p38抑制剂组比Erk抑制剂组的IL-8 mRNA表达明显升高，P＜0.05。　　11.应用p38抑制剂和Erk抑制剂后，Th1相关趋化因子IL-12 mRNA表达　　与正常组对比，IL-17刺激组IL-12 mRNA表达明显下降，p38抑制剂组、Erk抑制剂组均明显升高，P＜0.05。与IL-17刺激组比较，p38抑制剂组、Erk抑制剂组IL-12 mRNA表达均明显升高，P＜0.05。p38抑制剂组比Erk抑制剂组IL-12 mRNA明显升高，P＜0.05。　　结论:　　1.在阿霉素诱导的小鼠肾病模型中，肾组织IL-17表达异常增加，可以使中性粒细胞募集，参与ADR小鼠的炎症病理过程，少量的IL-17对正常肾脏功能的维持有一定作用。　　2.在阿霉素诱导的小鼠肾病模型中，血清IL-17的水平明显增高，提示IL-17促进ADR小鼠的炎症过程，而且它还能促使Th1细胞分化降低，大量的IL-17可以导致ADR小鼠严重的肾功能损害。　　3.小鼠腹腔注射中和IL-17抗体能够降低ADR小鼠血清IL-17的水平，减轻中性粒细胞募集，中和IL-17抗体抑制Th1细胞分化降低，肾功能获得改善。　　4.IL-17可能通过MAPK信号通路对小鼠肾足细胞炎症因子进行调控。　　5.IL-17能够激活p38及Erk路径信号，此过程中p38路径信号是主要的。　　6.IL-17促进中性粒细胞聚集，产生炎症反应，并且改变了天然CD4+T细胞向Th1/Th2分化的平衡，诱导其向Th2分化，抑制其向Th1分化。