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食品安全突发事件频率高是近年来食品安全问题的一个显著特点，坂崎肠杆菌是自1961年发现以来一直受全世界的关注的一种食源性致病菌，能在婴幼儿中引起脓血症、脑膜炎或坏死性小肠结肠炎特别是对新生儿或免疫力较低的婴儿，常会导致严重的后遗症甚至死亡。本文对婴儿配方奶粉中坂崎肠杆菌的PCR检测方法进行了研究。本试验以坂崎肠杆菌23S rDNA的保守序列，通过NCBI对比，根据其特异区片断设计引物。实验过程中对PCR反应体系中镁离子浓度、模板量及退火温度和循环数等PCR影响要素进行优化，确定了适宜的PCR反应体系和扩增程序，其反应体系为：2.5uL 10×PCR buffer（10 mmol／L Tris-HCl[pH 8.3]，50 mmol／L KCl，0.1％[wt／vol]gelatin，0.5％Tween 20），3.0uL 25 mmol／L Mg2+，2.0uL dNTPs混合物，0.5uL 10 uM正向引物，0.5uL 10 uM反向引物，0.25uL(5U uL-1)Taq酶，模板为FTA膜，水16.25uL，总反应体系25uL；PCR扩增程序为：PCR反应采用冷启动，94℃预变性5 min，94℃变性1 min，55.6℃退火45 s，72℃延伸1 min，34个循环，72℃终延伸10 min，反应产物在2％的琼脂糖凝胶中进行电泳，凝胶成像系统观察结果。对PCR扩增产物克隆到pMD-18T质粒上进行了DNA测序，PCR扩增产物DNA序列与靶基因序列的同源性达100％，从而证实PCR扩增产物确为目的扩增产物。采用PCR方法共检测了5株坂崎肠杆菌标准株和1株野生株及19株其它革兰氏阳性菌和阴性菌，结果表明6株坂崎肠杆菌为阳性结果，其它菌株均为阴性结果，因此本研究选择的引物特异性强且PCR方法的灵敏度为10-9。采用了七种坂崎肠杆菌基因组DNA提取方法，通过的比较，找出了一种最简便、最有力的提取方法。对该七种基因组DNA方法的检出限、操作过程和增菌时间等多方面进行了比较，确定最低检出限，依据每种方法检出限的不同，再次对婴儿配方奶粉进行污染，找出了每种方法的检测时间底线，避免了以往过夜培养造成的不必要的时间浪费。结果显示出利用FTA滤膜裂解坂崎肠杆菌细胞提取菌体DNA优于其它六种方法DNA提取方法，整个实验过程只需8 h就能完成，比传统增菌时间缩短了12～22 h。目前，坂崎肠杆菌的检测还未有国标方法，本实验与传统的FDA BAM方法、DFI方法、OK方法进行对比，并通过与VITEK自动生化鉴定系统为鉴定结果进行阳性对照，本试验共检验了35份样品其试验结果为：PCR方法检出率为14.3％，敏感性为80.0％，特异性为96.7％，符合率为94.3％，FTA膜方法检出时间为8 h，试剂盒法、普通热裂解法检出时间为11～12 h，溶剂热裂解法、溶菌酶解法、普通试剂法、蛋白酶K法检出时间为12～13 h；FDA BAM方法检出率为11.4％，敏感性为80.0％，特异性为100％，符合率为97.1％，检出时间为7 d；DFI方法检出率为11.4％，敏感性为80％，特异性为100％，符合率为97.1％，检出时间为5 d；OK方法检出率为17.1％，敏感性为80.0％，特异性为100％，符合率为91.4％，检出时间为5 d。四种方法的敏感性相同，PCR方法的特异性略低于BAM方法和DFI方法，但高于OK方法，PCR方法的符合率稍低于BAM方法和DFI方法但高于OK方法，比较之PCR方法检测时间比其他三种方法大大缩短。总之，利用FTA滤膜，采用PCR技术可只需增菌2 h检测到婴儿配方奶粉中的坂崎肠杆菌，灵敏度高，检测婴儿配方奶粉中的坂崎肠杆菌的检出限1.5CFU／100g。