【摘 要】
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鸡α型干扰素(IFN-α)是一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性和具有免疫增强作用的细胞因子.为了研制中国鸡干扰素生物制剂以及干扰素佐剂,进一步开展禽干扰素等细胞因子的研究工
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鸡α型干扰素(IFN-α)是一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性和具有免疫增强作用的细胞因子.为了研制中国鸡干扰素生物制剂以及干扰素佐剂,进一步开展禽干扰素等细胞因子的研究工作,该研究根据优良品种惠阳胡须鸡的INF-α基因序列,在其成熟肽和终止密码子序列间分别设计了含HindⅢ和BamHI酶切位点的一对通用引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法对一新亚型Ⅰ型干扰素基因(GGIFNα4)进行了亚克隆.结果表明,该研究成功地亚克隆了惠阳胡须鸡的IFN-α基因,缺少信号肽序列的GGIFNα4基因全长486bp,无内含子,编码162个氨基酸组成的成熟多肽.所构建的表达质粒pQE30/GGIFNα4在M15(pREP4)基因工程菌中成功表达了分子量约为22kDa的融合蛋白,与预测的大小一致.薄层扫描的结果显示重组IFN蛋白的表达量约占菌体总蛋白量的22﹪.SDS-PAGE检测和WesternBlot分析显示纯化的重组蛋白为N末端含6个组氨酸的融合蛋白,其纯度大于90﹪.抗VSV病毒活性试验的结果表明经复性的rGGIFNα4的抗病毒效价大于1×10<8>unit/mg,并可在活体水平抵抗禽流感病毒的感染.该研究的完成为生物工程发酵生产鸡重组干扰素打下了坚实的基础.
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