热休克蛋白Mortalin在肝癌细胞中的作用及其机制研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qween
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:通过慢病毒基因转载抑制热休克蛋白Mortalin的表达,并用western blot检测其与四跨膜蛋白CD151在肝癌细胞中的相互关系,以及对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)信号通路的影响,并研究其对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:1.通过吉满生物科技(上海)有限公司,体外利用easy RNAi慢病毒构建技术将干扰Mortalin合成依次标记为TRAP1、TRAP2、TRAP3的三个靶点序列基因分别用载体PGMLV-SC5 (2494):hU6-MCS-CMV-ZsGreen 1-PGK-Puro进行包装,转染至人肝癌细胞株HepG2中,转染细胞组标记为TRAP1细胞组、TRAP2细胞组、TRAP3细胞组,通过荧光表达率和western blot技术,选取TRAP1细胞组、TRAP2细胞组、TRAP3细胞组3组细胞中,转染效率最高即Mortalin表达下降最多的细胞组作为接下来的实验细胞组。然后再运用western blot技术比较未进行转染人肝癌细胞HepG2细胞组(空白对照组),未携带靶点序列病毒颗粒转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(阴性对照组)和Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(实验组),三组细胞中CD151的表达情况。2. 由第一部分实验筛选出的Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(实验组)与未进行转染人肝癌细胞HepG2细胞组(空白对照组),通过用western blot实验检测其PI3K/AKT信号通路中的关键蛋白:蛋白激酶B(AKT)及磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达,讨论Mortalin下调对HepG2细胞中PI3K/AKt信号通路的影响。3.分别应用划痕实验和Transwell小室检测抑制Mortalin表达后人肝癌细胞HepG2的迁移能力与侵袭能力的改变情况。结果:1.用于抑制Mortalin表达的三个靶点序列TRAP1、TRAP2、TRAP3转染的三组人肝癌细胞HepG2中,TRAP2序列转染的人肝癌细胞HepG2 (TRAP2细胞组)中Mortalin的表达下降最明显,并设为接下来实验的实验组。未进行转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(空白对照组),未携带靶点序列病毒颗粒转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(阴性对照组)和Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(实验组),通过Western blot进行比较后,CD151的表达未见明显下调,统计学无差异。2. Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(TRAP2细胞组)与未进行转染的人肝癌细胞HepG2细胞组相比较, PI3K/AKT信号传导通路中AKT略有下调,但是不明显,无统计学差异。P-AKT随Mortalin表达下降有所下调,有明显差异,具有统计学意义。3. Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(TRAP2细胞组)作为实验组、未进行转染的人肝癌细胞HepG2细胞组为空白组对照组,未携带靶点序列病毒颗粒转染的人肝癌细胞HepG2细胞组为阴性对照组。在Transwell室检测细胞侵袭能力实验中:将空白组与阴性对照组、实验组与阴性对照组、实验组与空白对照组,两两进行比较,实验组侵袭能力明显下将。在划痕实验中:在0小时,12小时,24小时,36小时四个时间段,对实验组与空白对照组划痕宽度进行比较,实验组迁移能力未见明显改变。结论:1.在人肝癌细胞中,抑制HepG2表达后,CD151表达未出现明显Mortalin下调,二者表达无相关关系。2. 抑制人肝癌细胞中HepG2的表达后,Mortalin信号传导通PI3K/AKT路中AKT无明显下调,说明的下调对人肝癌细胞Mortalin中总AKT量HepG2并不产生影响,而随P-AKT表达下降有所下调,差别明显,说明Mortalin的下调会引起人肝癌细胞Mortalin内HepG2信号传导通路中AKT磷酸化的下PI3K/AKT降,而这种差别并不是由于总AKT量的表达不等造成,是由于抑制人肝癌细胞中HepG2的表达后,会抑制AKT活化,从而抑制Mortalin信号传导PI3K/AKT通路的信号转导。3.在细胞侵袭实验中:未进行转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(空白对照组)与未携带靶点序列病毒颗粒转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(阴性对照组)侵袭细胞数无明显差异(p>0.05),说明空载病毒本身并不会对人肝癌细胞HepG2的侵袭能力产生改变,未进行转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(空白对照组)侵袭细胞数较Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(TRAP2细胞组)实验细胞组侵袭有明显差异(p<0.05),未携带靶点序列病毒颗粒转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(阴性对照组)侵袭细胞数较Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(TRAP2细胞组)实验细胞组侵袭也有明显差异(p<0.05),与空白对照组和阴性对照组比较结果相符合。说明抑制人肝癌细胞HepG2中Mortalin的表达,对其体外侵袭能力有显著影响。在细胞迁移实验中:比较Mortalin表达下降最多的人肝癌细胞HepG2细胞组(TRAP2细胞组)实验细胞组与未进行转染的人肝癌细胞HepG2细胞组(空白对照组)在0小时,12小时,24小时,36小时划痕宽度,均无明显差异(p>0.05),说明抑制Mortalin的表达,并不能抑制人肝癌细胞HepG2体外迁移能力。
其他文献
我国工业硝酸钾生产能力已过剩,市场饱和;而农用硝酸钾市场处于剧烈变动状态。有可能出现盲目发展农用硝酸钾的现象。决定企业发展的前景和生存的关键因素不是市场问题,而是
目的 探讨快速康复外科护理模式在腹腔镜胆囊切除术治疗老年糖尿病合并胆道系统疾病患者中的应用效果。方法 选择2017年2月至2018年1月医院收治的老年糖尿病合并胆道系统疾病
目的分析阴道超声配合血清NGF、IGF-1检测在子宫腺肌病阳性率诊断中的价值。方法选取2014年2月至2016年8月武汉科技大学附属医院收治的疑似子宫腺肌病患者58例作为研究对象(
<正>2007年,参加了部分基层单位领导班子专题民主生活会。各单位都积极做了充分准备。通过民主生活会,查找出了领导班子自身存在的问题,并制定了整改措施,使存在的问题逐步得
会议
全球经济一体化与日新月异的信息革命,多元化趋势的组织业务以及密切协作的部门工作都对企业的高层领导提出新的挑战。高层领导的工作方式发生了改变,以前那种领导人单打独斗的
目的研究鼓膜穿刺或鼓膜置管联合咽鼓管球囊扩张术(BET)治疗慢性分泌性中耳炎的效果。方法选择接受手术治疗的慢性分泌性中耳炎患者100例,根据随机双盲法分为对照组和观察组
党的十九大指出:“人民健康是民族昌盛和国家富强的重要标志。要完善国民健康政策,为人民群众提供全方位全周期健康服务。”健康扶贫是脱贫攻坚战中的一场重要战役,事关贫困人口
报纸
债权人代位权是合同保全制度的重要组成之一,它是对债的一种保全制度,是专门为债务人不积极的行使自己权利从而危及到债权,由国家法律赋予债权人代位行使债务人的债权,以此可
华裔作家受中国传统文化的影响很深,其文学作品中体现了中国传统文化现象,通过对中国神话和民间传说的运用,饮食文化和风俗习惯的描写,美国华裔作家更加了解祖先的文化,更能
在对海岸带地貌发育主要影响因素进行讨论的基础上,根据实测数字声纳资料,对青岛海岸带近岸海区海底冲刷槽、潮流脊、侵蚀洼地、水下岸坡、潮滩、岛礁等地貌类型及次级微地貌