黄皮叶提取物对哮喘大鼠气道炎症的抑制及调节细胞因子Th1/Th2平衡的作用

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目的:我们将通过黄皮叶的有效成分的提取,哮喘大鼠模型的建立,测定外周血中EOS数目、肺组织内NO含量及Thl分泌的IFN-y及Th2分泌IL-4的含量,从整体动物水平研究不同浓度黄皮叶提取物对哮喘大鼠气道炎症及Thl/Th2细胞因子的调节作用,从而初步探讨黄皮叶提取物对哮喘气道炎症调节的作用机制。方法:用乙醇回流提取法提取黄皮叶的有效成分,卵清蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,并以不同浓度黄皮叶提取物灌胃,采用苏木素伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理改变,测大鼠外周血中嗜酸性粒细胞(EOS)数目,用硝酸还原酶法测大鼠肺组织中一氧化氮(NO)的含量,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清细胞因子IFN-y、IL-4的情况,逆转录合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肺组织中IFN-Y mRNA、IL4mRNA的表达水平。结果:(1) HE染色及显微镜观察:哮喘组大鼠支气管、肺泡及肺间质充斥大量炎症细胞、粘膜层肿胀充血、皱折增多。地塞米松组及黄皮叶提取物组上述炎症反应明显减轻。黄皮叶提取物低浓度组、黄皮叶提取物中浓度组炎症情况较黄皮叶提取物高浓度组严重,较模型组有所减轻,正常对照组肺组织结构正常,无明显炎症表现。(2)外周血中嗜酸性粒细胞(EOS)计数:模型组(A组)大鼠外周血中嗜酸性粒细胞数目明显高于正常对照组(P <0.01),药物组外周血中嗜酸性粒细胞数目均低于模型组(P <0.05),且药物组嗜酸性粒细胞数目较正常对照组高(P<0.05)。药物组中,黄皮叶提取物低浓度组嗜酸性粒细胞数目高于黄皮叶提取物中浓度组(P <0.05),黄皮叶提取物中浓度组嗜酸性粒细胞数目高于黄皮叶提取物高浓度组(P <0.05),黄皮叶提取物高浓度组嗜酸性粒细胞数目高于地塞米松组(P<0.05)。(3)硝酸还原酶法测哮喘大鼠肺组织内一氧化氮(NO)含量:模型组大鼠肺组织内一氧化氮含量明显高于正常对照组(P <0.01),药物组大鼠肺组织内一氧化氮含量均低于模型组(P <0.05),且药物组大鼠肺组织内一氧化氮含量较正常对照组高(P <0.05)。黄皮叶提取物组中,黄皮叶提取物低浓度组大鼠肺组织内一氧化氮含量高于黄皮叶提取物中浓度组(P <0.05),黄皮叶提取物中浓度组大鼠肺组织内一氧化氮含量高于黄皮叶提取物高浓度组(P <0.05),黄皮叶提取物高浓度组大鼠肺组织内一氧化氮含量高于地塞米松组(P<0.05)。(4) ELISA法检测各组哮喘大鼠血清中IFN-y、IL-4蛋白含量与RT-PCR检测大鼠肺组织中IFN-y、IL-4mRNA含量:模型组大鼠血清及肺组织中IFN-y含量明显低于正常对照组(P <0.01);黄皮叶提取物高浓度组含量高于黄皮叶提取物中浓度组(P <0.05);黄皮叶提取物中浓度组高于黄皮叶提取物低浓度组(P <0.05);黄皮叶提取物低浓度组高于模型组(P <0.05),黄皮叶提取物高浓度组低于地塞米松组(P <0.05),地塞米松组低于正常对照组(P <0.05)。模型组大鼠大鼠血清及肺组织中IL-4含量明显高于正常对照组(P<0.01);黄皮叶提取物高浓度组低于黄皮叶提取物中浓度组(P <0.05);黄皮叶提取物中浓度组低于黄皮叶提取物低浓度组(P <0.05);黄皮叶提取物低浓度组低于模型组(P <0.05),黄皮叶提取物高浓度组低于地塞米松组(P <0.05),地塞米松组高于正常对照组(P<0.05)。结论:1、黄皮叶提取物能抑制哮喘的气道炎症,且与黄皮叶的浓度呈量效关系。2、不同浓度黄皮叶提取物通过下调IL-4的表达,上调IFN-y的表达调节哮喘大鼠Thl/Th2细胞因子失衡,抑制哮喘大鼠气道炎症。
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