罗非鱼加工过程中会产生大量的富含胶原蛋白的鱼皮废弃物,目前只有一小部分用于制作饲料或者肥料,绝大部分当做废物丢弃从而污染环境。利用罗非鱼皮提取并酶解成胶原蛋白肽,不仅可以提高其附加值,还能减少资源浪费及环境问题。但是目前国内的胶原蛋白肽产品存在鱼腥味重、色泽深、多肽分子量分布不集中、产量不足的缺点。鉴于此,本文以罗非鱼皮为原料,将鱼皮经过一定程度的脱脂脱腥处理,筛选最适合的水解蛋白酶对其进行酶解,通过单因素响应面实验确定最优的水解工艺,利用活性炭对其进行脱色处理,研究其相关的活性,并对其进行分离纯化。主要研究结果如下:1、罗非鱼皮水分含量为10.25%、蛋白质含量为76.98%、脂肪含量为11.10%,灰分含量为1.22%,胶原蛋白含量为62.05%。鱼皮脱脂选择萃取时间、萃取温度、萃取压力3个因素,以鱼油得率为试验指标,对提取条件进行单因素分析,由试验结果可知,各因素的最优组合为萃取时间50 min,萃取温度50℃,萃取压力0.5 MPa,解析温度70℃,物料水分为10.25%,此时得率为10.47%,脱脂率高达94.32%。用低温连续相变萃取最优工艺条件来对鱼皮脱脂及脱腥处理,为后期制备高品质罗非鱼皮胶原蛋白肽奠定了基础。低温连续相变萃取鱼油外观为黄色至红棕色,有较淡的鱼腥味,无异味。水分及挥发物为0.26%,碘值为123.47 gI/100g,酸价为7.83 mgKOH/g,过氧化值为1.25 mmol/kg,不溶性杂质0.23%,其达到了粗鱼油一级质量标准(SC/T3502-2000),鱼油中无溶剂残留,说明鱼油还可以用于其他方面的研究。鱼油共鉴定出27种脂肪酸,饱和脂肪酸占所有脂肪酸的28.35%,单不饱和脂肪酸占所有脂肪酸的34.75%,多不饱和脂肪酸占所有脂肪酸的28.40%。2、综合比较水解度、分子量分布、感官评价和羟脯氨酸含量指标,碱性蛋白酶感官评价最好,水解度较高,180-1000 Da分子量的较多,<180 Da分子量(游离氨基酸)的含量较少,羟脯氨酸含量较高,因此确定碱性蛋白酶为制备罗非鱼皮胶原蛋白肽的最佳用酶。3、以水解度、分子量分布和羟脯氨酸含量为指标,考察不同酶解时间、pH、温度、加酶量和料液比对碱性蛋白酶酶解效果的影响。在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken响应面法的要求,选取影响酶解物的四个因素:时间、加酶量、温度、pH为自变量,以水解度(DH)为响应值。采用四因素三水平的响应面分析方法,以优化得到最佳的胶原蛋白肽提取工艺参数。碱性蛋白酶水解的最佳工艺条件为:时间7 h、加酶量7%、温度60℃、pH值10.38,在此条件下碱性蛋白酶水解罗非鱼皮的水解度为23.01%。4、选择活性炭添加量、脱色温度、脱色时间、脱色pH共4个因素,以脱色率和蛋白质回收率为试验指标,对脱色条件进行单因素分析,由试验结果可知,各因素的最优组合为活性炭添加量1.00%、脱色温度50℃、脱色时间45 min、脱色pH5.0,经过试验验证,此时脱色率为69.32%、蛋白质回收率为87.43%。在这种条件下胶原蛋白肽的脱色效果是最好的,同时蛋白质也损失较少。5、对脱色后的胶原蛋白肽进行相关的活性研究。该胶原蛋白肽对酪氨酸酶的活性有抑制作用,但是与曲酸对比,抑制作用稍低,本方法可以初步证明该胶原蛋白肽能够抑制酪氨酸酶的活性。在透皮吸收扩散实验中,利用BCA法检测的多肽含量的结果与GFC法检测的结果趋势相同,透皮吸收率在24 h内分别达到49.73%和53.75%,说明其具有良好的透皮吸收性能,利用HPLC-C18定性检测的结果可知,胶原蛋白肽的其中三个组分透过量最多。6、胶原蛋白肽促HSF细胞的增殖及其分离纯化的研究。胶原蛋白肽能促进HSF细胞的增殖,增殖率最大值达到71.25%。以HSF细胞的增殖率为指标,对胶原蛋白肽进行分离纯化。结果表明通过反向硅胶玻璃柱分离的四个组分(A、B、C和D)对HSF细胞的增殖均有不同程度的促进作用。其中A组分的促增殖能力最强,最大增殖率达到32.11%。因此,选择A组分进行下一步的分离纯化。接着分离获得四个组分A1、A2、A3和A4,各组分对HSF细胞的增殖均有不同程度的促进作用。总体来说,A1组分的促增殖能力最强,最大增殖率达到55.12%。同时将分离后的各组分用HPLC测定其纯度,根据出的峰型判断纯度,结果表明,经过分离纯化后的胶原蛋白肽的纯度不断升高。