目的 在重组酶聚合酶等温扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）的基础上,建立单重及四重逆转录重组酶聚合酶等温扩增方法（Reverse Transcription-Recombinase Polymerase Amplification,RT-RPA）,在单个反应中对登革热病毒（Dengue virus,DENV）、黄热病毒（Yellow fever virus,YFV）、基孔肯雅热病毒（Chikungunyavirus,CHIKV）、寨卡病毒（Zikavirus,ZIKV）的感染进行快速诊断及鉴别诊断。方法①通过特异性引物和探针的设计及筛选,建立单重RT-RPA体系用以分别检测DENY、YFV、CHIKV、ZIKV质粒标准品,并对其特异性、灵敏度和重复性进行评价。②在单重RT-RPA体系的基础上,利用正交设计对不同反应组分进行优化筛选,建立四重RT-RPA体系用以同时检测DENV、YFV、CHIKV、ZIKV质粒标准品,并对其特异性、灵敏度和重复性进行评价。③采用体外合成RNA样本以及临床血清样本对建立的单重RT-RPA及四重RT-RPA反应体系及其特异性、灵敏度和重复性进行验证。同时比较RT-PCR、单重RT-RPA、四重RT-RPA方法阳性标本检出率的差异。结果①单重RT-RPA及四重RT-RPA反应体系均可检出DENV、YFV、CHIKV、ZIKV的质粒标准品、体外合成RNA样本以及临床样本。②单重及四重RT-RPA反应体系与常见病原体无交叉反应,单重RT-RPA对DENV、ZIKV、CHIKV、ZIKV质粒标准品的检出限分别为 1× 102 copies/ml、1 × 1 02 copies/ml、1 × 1 02 copies/ml、＜1 × 1 02 copies/ml,四重RT-RPA对经注射用水稀释的DENV、CHIKV、YFV、ZIKV体外合成RNA的检出限分别为 5× 102copies/ml、5×102copies/ml、5×102copies/ml、5×103copies/ml,对经正常人血清稀释的DENV、CHIKV、YFV、ZIKV的体外合成RNA的检出限分别为5×103copies/ml、5×103copies/ml、5×103copies/ml、5×103copies/ml。③单重 RT-RPA 及四重RT-RPA法与RT-PCR法阳性标本检出率差异无统计学意义（P=0.972）。结论 本研究建立的单重及四重RT-RPA检测方法可用于对DENV、CHIKV、YFV、ZIKV质粒标准品、体外合成RNA以及临床样本的检测,且特异性好、灵敏度高、重复性好,对标本的检出率与RT-PCR法无明显差异。对蚊媒传染病的早期诊断及鉴别诊断具有很重要的意义,同时也可为其他新发再发传染病的快速诊断方法建立提供研究方向。