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CD74即MHC-Ⅱ类分子相关恒定链(major histocompatibility complexⅡ-associated invariant chain, Ii),主要表达于树突状细胞、单核巨噬细胞、B细胞等抗原提呈细胞(antigen presenting cells, APC),是在内质网中与新合成MHC-Ⅱ类分子连接在一起形成九聚体的辅助分子,属Ⅱ型膜分子,与抗原提呈功能有关。近来研究还发现CD74可做为巨噬细胞移动抑制因子的受体,与相应细胞因子结合激活NF-κB和ERK1/2信号转导途径,进而诱导炎性细胞因子的分泌；研究还发现,CD74除了表达于抗原提呈细胞,与抗原提呈有关外,CD74分子还在内皮细胞、肿瘤细胞表达,与相应疾病的发生、发展有关。血管内皮细胞是位于血管内壁的单层细胞,具有分泌血管活性物质、参与炎症细胞和免疫细胞游走、维持血管舒缩等多方面生物学功能。脐静脉内皮细胞因具有人体血管内皮细胞的基本特性,且新生儿脐带来源充足、取材容易、操作方便,而成为血管内皮细胞体外研究的主要材料。ECV304是常用的人脐静脉内皮细胞,也是研究内皮细胞生物学特性与疾病相关性的重要手段。本文将CD74基因转染ECV304细胞,旨在探讨CD74基因在HUVEC的转染条件和CD74基因转染对细胞特性及功能的影响,为深入研究基于调节CD74表达的生物治疗打下基础。研究方法1)将含有CD74 cDNA的pCMV-CD74 EGFP荧光质粒通过转化大肠杆菌进行扩增、质粒提取、并经酶切和测序进行鉴定；2)将pCMV-CD74质粒转染脐静脉内皮细胞ECV304,通过EGFP荧光质粒对ECV304细胞进行转染率的检测；3) pCMV-CD74质粒转染前后ECV304细胞CD74 mRNA和CD74分子表达的鉴定：采用免疫组化法和Western blot,检测转染前后ECV304细胞CD74分子的表达；采用Real-time RT-PCR法检测转染后CD74 mRNA水平的表达；4) pCMV-CD74质粒转染前后ECV304细胞功能相关基因(HLA-A、HLA-DR、IFNGR)表达的检测：采用Real-time RT-PCR比较转染前后脐静脉内皮细胞各功能相关基因的表达；5)应用Real-time RT-PCR分析软件分析实验数据。结果1)在大肠杆菌扩增后提取的质粒经EcorⅠ单酶切,电泳显示pCMV-CD74质粒线性大小约4.7kb; EcorⅠ和XbalⅠ双酶切可见大小约1.35kb的基因片段,与CD74 cDNA全长(1.327kb)大小符合,并经测序分析符合CD74基因序列；2)荧光显微镜观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况,并且经过计算得出脂质体介导的转染率是65.8%；3)免疫组化结果显示,转染后,ECV304细胞CD74表达增强；Real-time RT-PCR结果显示,实验组△Ct值为4.8599,对照组△Ct值为9.2496,2-△△Ct结果为20.9619大于2,有统计学意义,说明转染后CD74 mRNA表达显著升高；4) Real-time RT-PCR结果显示,转染前后ECV304细胞HLA-AΔCt值分别为9.4881和12.1097,2-△△Ct为6.1543大于2,说明转染前后HLA-A表达有显著差异；IFNGRΔCt值分别为4.9828和5.5228,2-△△Ct为1.4539小于2,转染前后无显著差异；HLA-DRΔCt值分别为14.1098和14.7924,2-△△Ct为1.3036小于2,转染前后无显著差异。小结人脐静脉内皮细胞ECV304表达HLA-A、HLA-DR、IFNGR和CD74 mRNA; pCMV-CD74转染可增加ECV304细胞CD74基因和膜分子的表达,增加HLA-A基因的表达,但不增加HLA-DR和IFNGR的表达,为深入探讨CD74基因与内皮细胞功能的相关性提供实验数据。