第一部分醛固酮通过TGF-β₁途径调节足细胞表达基质金属蛋白酶2和9目的：观察醛固酮（Aldosterone，ALD）及其受体拮抗剂刺激对足细胞产生基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases，MMP-2）和9（MMP-9）、Ⅳ型胶原的影响及探讨ALD对足细胞细胞外基质（extracellular matrix，ECM）分泌、降解的调节机制。方法：（1）为观察ALD对足细胞ECM分泌、降解作用的量效、时效关系，分别用不同浓度(10^-11 M、10^-9 M、10^-7 M)、不同作用时间（24h、48h、72h）ALD作用于足细胞并设立空白对照组，明胶酶谱、Western blot、酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测足细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、Ⅳ型胶原α5链、转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁，TGF-β₁）的变化，流式细胞仪方法检测足细胞黏附率变化。（2）为观察ALD对足细胞的作用是否通过盐皮质激素受体（mineralocorticoid receptor，MR）介导，应用ALD受体拮抗剂螺内酯（Spironolactone，SPI）预处理细胞后，再加入ALD刺激，检测以上指标的变化。（3）为观察TGF-β信号通路是否参与了ALD对足细胞的作用，应用TGF-β₁受体抑制剂SB431542预处理细胞后，再加入ALD刺激，检测足细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性、Ⅳ型胶原α5链蛋白表达及足细胞黏附率的变化。结果：（1）与对照组相比，ALD可以时间及剂量依赖性方式导致培养上清液中MMP-2、MMP-9活性升高（P＜0.05）；Ⅳ型胶原α5链蛋白表达下降（P＜0.05）；TGF-β₁蛋白表达升高（P＜0.05）。（2） ALD受体拮抗剂SPI可完全阻断上述变化（P＜0.05）。（3） TGF-β₁受体抑制剂SB431542可部分阻断ALD刺激引起的培养上清液中MMP-2、MMP-9活性升高及Ⅳ型胶原α5链蛋白、足细胞黏附率的下降（P＜0.05）。（4）对足细胞表达MMP-2、MMP-9、TGF-β₁及Ⅳ型胶原α5链蛋白分别进行相关性分析，结果显示细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9的活性与Ⅳ型胶原α5链蛋白的表达呈显著负相关（P＜0.05），MMP-2、MMP-9的活性与TGF-β₁蛋白的表达呈显著正相关（P＜0.05）。结论：ALD可通过TGF-β₁途径使足细胞产生MMP-2、MMP-9活性升高，Ⅳ型胶原α5链蛋白表达下降，足细胞黏附率下降，从而使足细胞分泌基底膜（glomerular basement membrane，GBM）成分异常，GBM合成及降解失衡，导致足细胞损伤。第二部分ALD促进足细胞凋亡：活性氧的作用目的：观察ALD及其受体拮抗剂对活性氧（reactive oxygen species，ROS）产生、足细胞凋亡的影响，并观察抗氧化剂对ALD诱导足细胞凋亡的干预效果。方法：（1）为观察ALD及其受体拮抗剂对活性氧产生、足细胞凋亡的影响，将足细胞分为空白对照组、ALD组、SPI组、ALD+SPI组，流式细胞仪检测足细胞凋亡的变化，荧光分光光度计检测足细胞内ROS水平的变化，间接免疫荧光检测足细胞Nephrin的变化，逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR）、Western blot方法检测Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白水平的变化。（2）为观察ROS是否参与了ALD对足细胞的作用，应用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）预处理细胞后，再加入ALD刺激，流式细胞仪、间接免疫荧光检测足细胞凋亡及Nephrin表达的变化，RT-PCR、Western blot方法检测Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白水平的变化。结果：（1）与对照组相比，ALD可诱导足细胞凋亡及细胞内ROS产生增多（P＜0.05）；Nephrin表达降低（P＜0.05）；Bax mRNA及蛋白表达升高（P＜0.05）；Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低（P＜0.05）。ALD受体拮抗剂SPI可完全阻断上述变化（P＜0.05）。（2）抗氧化剂可明显抑制ALD刺激引起的足细胞凋亡（P＜0.05）及Nephrin表达下调（P＜0.05），降低足细胞中Bax mRNA及蛋白的表达（P＜0.05），升高Bcl-2 mRNA及蛋白的表达（P＜0.05）。结论：ALD可通过作用于MR上调促凋亡因子Bax mRNA及蛋白的表达，下调抑凋亡因子Bcl-2 mRNA及蛋白的表达诱导足细胞凋亡，这一作用可能是通过ROS介导的。第三部分依普利酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用目的：探讨依普利酮对阿霉素肾病大鼠肾脏病变的影响。方法：（1） 36只健康、成年雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组、阿霉素模型组、依普利酮干预组(100mg．kg^-1．d^-1)。一次性尾静脉注射阿霉素造模，依普利酮干预组于术前1天开始用相应药物等量灌胃，给药28天。对照组和模型组以等量蒸馏水灌胃28天。（2）生化指标检测：第28天各组大鼠处死前测血压及收集24h尿液检测尿蛋白含量，处死时取血检测血钾、钠、肌酐。（3）左侧肾组织行HE、PAS染色，并制作电镜标本，观察肾小球及足细胞病变情况。（4）免疫组化、Western blot方法检测肾皮质中TGF-β₁、结蛋白（desmin）表达变化。结果：（1）生化指标、血压：各组大鼠血清钠、钾、肌酐、血压之间均无显著性差异（P＞0.05）；阿霉素模型组24h尿蛋白排泄量较对照组显著升高（P＜0.01），依普利酮干预组24h尿蛋白排泄量较阿霉素组显著降低（P＜0.05）。（2）肾组织病理学改变：与对照组比较，PAS染色显示阿霉素模型组术后第28天部分肾小球系膜细胞及基质轻度增生，电镜结果显示弥漫性足细胞损伤，足突扁平、变形、融合，而依普利酮干预组大鼠肾小球系膜增生及足突融合程度均较阿霉素模型组明显减轻。（3）免疫组化：与对照组相比，阿霉素模型组肾小球中TGF-β₁、desmin表达显著升高（P＜0.01），而依普利酮干预组肾小球中TGF-β₁、desmin表达均较阿霉素模型组明显减少（P＜0.05）。（4） Western blot：与对照组相比，阿霉素模型组肾皮质中TGF-β₁、desmin表达显著升高（P＜0.01），而依普利酮干预组肾皮质中TGF-β₁、desmin表达均较阿霉素模型组明显减少（P＜0.05）。结论：依普利酮可通过抑制细胞因子释放、改善肾小球足细胞损伤等非血压依赖机制减少蛋白尿，延缓阿霉素肾病的进展。