2011年5月台湾地区发生“塑化剂”事件，这一事件的元凶——邻苯二甲酸（2—乙基己基）酯(DEHP)得到了全社会空前的关注。DEHP在工业上有广泛的应用，常用来增强塑料的可塑性，主要用在聚氯乙烯（PVC）塑料制品中，在保鲜膜、食品包装材料、玩具以及医疗器械用品中均有应用。在这次事件中DEHP被不法商家用在食品饮料中以代替食品添加剂“起云剂”，这是近年来台湾最严重的食品安全事件。此外，对于添加了DEHP的PVC塑料制品做成的食品包装材料，DEHP也可能从食品包装材料中迁移到食品或水中。人们对于DEHP对动物和人体的毒性已经有广泛的研究，除了DEHP对生殖和发育系统的影响以外，也有大量实验结果表明DEHP可通过氧化损伤对不同种系的体外培养的细胞产生毒性作用。细胞的氧化损伤是氧化和抗氧化作用失衡的结果，氧化损伤是引起组织和细胞凋亡的一个重要机制。人体脑组织中含有的与氧化有关的物质水平较高，同时脑内抗氧化酶及非酶的自由基清除剂含量很低，使得脑组织极容易受到自由基损伤，脑内神经元的死亡与多种神经退行性疾病有关。大脑海马是学习和记忆的主要场所，海马神经元的损伤与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）有密切关系。本论文重点研究DEHP对体外培养的海马神经元的毒性作用，探讨其对中枢神经系统的影响。实验目的：从细胞水平上研究DEHP对海马神经元的毒性作用，从而揭示DEHP对中枢神经系统可能的影响，为DEHP的安全性评价提供一定的数据支持。实验方法：采用无血清培养方法进行Wistar大鼠胎鼠海马神经元的培养，在倒置荧光显微镜下观察海马神经元生长状态，及DEHP对神经元形态的影响。根据相关的文献中DEHP对细胞起到毒性作用的浓度摸索DEHP引起海马神经元毒性的浓度，用MTT法研究DEHP对海马神经元活力的影响。通过荧光染料Hoechst 33258染色观察，及凋亡酶Caspase-3活力测定，研究海马神经元的凋亡。用荧光染料DCFH-DA对培养海马神经元进行荧光染色，通过激光扫描共聚焦显微镜分析细胞内ROS的水平，并测定神经元超氧化物歧化酶（SOD）活力及谷胱甘肽（GSH）的含量，探究DEHP对海马神经元的氧化损伤。实验结果：与用胎牛血清培养的神经元相比，无血清培养能得到纯度较高并且生长状态良好的神经元。经过浓度摸索，最终确定试验中采用的DEHP浓度分别为0.25mM，0.5mM，1mM，2mM，3mM。形态观察和MTT实验结果表明DEHP造成海马神经元形态的改变和细胞活力的下降，并且这一影响与DEHP浓度具有量-效关系，其中3mM作用组细胞活力为对照组的52%。Hoechst 33258染色后观察发现，细胞DNA皱缩，并出现凋亡小体，且Caspase-3活性显著升高，表明DEHP诱导海马神经元出现凋亡。DEHP导致神经元产生大量ROS，同时有SOD活力下降及GSH表达量下降，对海马神经元造成氧化损伤。