FAT10 siRNA增强顺铂对肝癌化疗敏感性的实验研究

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目的:将抑制类泛素蛋白FAT10表达的siRNA序列,利用脂质体转染至人原发性肝细胞肝癌细胞株Hep3B及MHCC-97h。探讨FAT10对原发性肝细胞肝癌化疗敏感性的影响,为进一步研究肝癌的综合治疗提供理论依据。方法:一、把每株细胞分成四组,即正常组、FAT10干扰组、单纯加顺铂组、FAT10十扰+顺铂组,利用脂质体将FAT10 siRNA转染至人肝细胞癌Hep3B细胞及MHCC-97h细胞,观察其生长曲线。二、实时荧光定量PCR检测各组细胞中Bcl-2及Bax mRNA的表达变化,Western blot检测各组细胞中Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。三、采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果:实时荧光定量PCR及Western blot结果证实干扰成功,干扰FAT10后肝癌细胞的生长受到抑制,干扰FAT10加顺铂后更为明显;实时荧光定量PCR及Westernblot结果显示干扰FAT10加顺铂组Bcl-2的mRNA及蛋白表达明显降低,Bax的mRNA及蛋白表达明显增高;流式细胞仪检测表明干扰FAT10后主要使细胞阻滞在G0/G1期,并诱发细胞凋亡,而干扰FAT10加顺铂后更为明显。结论:干扰FAT10后对肝癌化疗的敏感性有明显的增强作用,有可能为进一步研究肝癌的综合治疗提供理论依据。
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