降胆固醇益生乳酸菌的筛选及其在大鼠体内的应用研究

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随着社会的进步,生活水平的不断提高,人们膳食营养的摄入过量而引起的心脑血管疾病的发生率逐年上升,而诱发心脑血管疾病的主要因素之一是血清胆固醇水平超标,因此降低人体中胆固醇的含量对人类的健康至关重要。本课题研究的主要内容是对从内蒙古传统乳制品中分离出的乳酸菌进一步筛选,综合模拟人工胃肠液的耐受性、疏水性能力及去结合胆盐能力等指标获得一株降胆固醇功能较好的益生潜力菌株,研究其生物学特性及在大鼠体内的降胆固醇特性,为菌株的进一步开发应用奠定科学的理论基础。利用邻苯二甲醛方法对4株供试乳酸菌在MRS-TRIO-OX-CHOL选择性培养基(含100μg/mL胆固醇)厌氧条件下进行胆固醇去除率的测定,结果表明4株乳酸菌的胆固醇去除率在42.47%-58.32%之间,90-1菌株的胆固醇去除率最高。利用16S rDNA同源性分析的方法对4株乳酸菌进行鉴定,菌株90-1和L39-1为屎肠球菌,菌株L46-2为粪肠球菌,菌株L46-3为植物乳杆菌。模拟人体胃肠道环境,测定菌株在酸性和高浓度胆盐条件下的存活情况。结果表明4株菌具有较强的耐酸和耐胆盐能力,完全可以通过胃进入肠道并保持很高的活菌数。在肠道环境中处理24h后活菌数都在4.7×107以上,屎肠球菌90-1表现出最强的耐受力。采用定性平板法测定菌株的胆盐水解酶活性,均有白色的沉淀圈产生,说明这4株菌在生长过程中可能具有一定的胆盐水解酶活力。同时对菌株的去结合胆盐能力进行评价,菌株产胆酸量在2.43-3.35mM之间,其中屎肠球菌90-1产胆酸效力最高。综合胆固醇去除率及三个筛选指标,屎肠球菌90-1作为降胆固醇潜力菌株综合性能较好,可以作为目标菌株进行下一步研究。屎肠球菌90-1的生物学特性结果显示,最适生长温度为37℃,最适起始生长pH在5-7之间。测定生长曲线结果可知,菌株生长较为旺盛,2h进入对数期,12h后生长稳定。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和李斯特菌均有良好抑制作用。利用Kirby-Bauer纸片法选择6种标准药敏片对屎肠球菌90-1进行药敏试验,结果表明该菌株对6种抗生素均没有抗性。通过观察血琼脂平板上菌落周围的溶血圈,判定屎肠球菌90-1没有溶血作用。在体外研究的基础上,对屎肠球菌90-1应用于大鼠体内,研究其在体内的降胆固醇特性。大鼠适应性喂养一周,设饲喂普通饲料的对照组A、饲喂高脂饲料的高脂组B和灌喂菌液组C。实验28d,大鼠禁食14h采血,分离血清,检测菌液对大鼠血清血脂四项的影响,对肝脏总胆固醇TC、粪便总胆固醇TC、粪便总胆酸TBA以及脏器指数的影响。结果发现,灌喂菌液组与高脂组相比,大鼠血清中TC、肝脏TC含量均有显著下降(p<0.05);粪便中TC和TBA含量升高;TG、HDL-C、LDL-C及各脏器指数均无显著差异。研究结果表明,屎肠球菌90-1在饲喂期间对高脂饮食的大鼠没有明显的毒副作用,具有一定的降血脂效果,在体内能发挥一定的降胆固醇作用。
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