异常黑胆质成熟剂总黄酮抑制人宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖作用的研究

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目的:优选异常黑胆质成熟剂(ASMq)总黄酮的提取、纯化工艺,使其含量达到50%以上;观察ASMq总黄酮抑制人宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖作用,并探讨其对HeLa、SiHa细胞抗氧化能力的影响,从而为ASMq的利用和开发提供理论依据。方法:(1)采用L9(34)正交试验方法优选ASMq总黄酮的提取工艺;采用单因素试验和L9(34)正交试验法优选聚酰胺吸附树脂最佳分离、纯化工艺。(2)采用常规细胞株及细胞培养、传代方法,对HeLa、SiHa细胞进行培养、传代,取对数生长期细胞并进行药物干预,通过MTT法探讨其抑制人宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖的作用;倒置显微镜观察其细胞形态学变化;荧光倒置显微镜观察细胞动态学变化;检测ASMq总黄酮作用下HeLa.SiHa细胞总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)及总超氧化物歧化酶(T-SOD)的含量,探讨其增强HeLa、SiHa细胞的抗氧化作用。结果:(1)正交试验优选的ASMq,总黄酮提取工艺为8倍量的70%的乙醇提取1次,时间为1h。聚酰胺树脂优选纯化工艺条件为,采用聚酰胺树脂,洗脱剂采用70%乙醇,洗脱流速为1.0mL/min,样液浓度为15mg/mL,使ASMq、总黄酮含量达到57.6%。(2)MTT实验结果表明,ASMq总黄酮不同时间、不同浓度均抑制HeLa、SiHa细胞的增殖,其中浓度为400ug/mL、作用时间为72h时,更为明显。倒置显微镜细胞形态学观察可见,给药组中悬浮细胞增多,细胞质混浊,细胞胞体缩小、变圆、皱缩,核固缩碎裂,细胞折光性减弱,细胞内出现颗粒样物质,培养液中有较多的细胞碎片。荧光倒置显微镜观察结果表明,当ASMq总黄酮浓度为100μg/mL时,随着时间的延长细胞发生的凋亡现象较为明显。当作用时间为24h时,随着浓度的增高细胞发生的凋亡现象较为明显;ASMq总黄酮作用于细胞24、48、72h后,不同剂量均增加HeLa、SiHa细胞T-AOC及T-SOD、GSH含量,其差别有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组为明显。结论:ASMq,总黄酮的提取纯化工艺合理、稳定。ASMq总黄酮能够抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖作用较明显,能够增强细胞的抗氧化能力。
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