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背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)在世界恶性肿瘤中位居第五位,全球年死亡人数约60万人。我国HCC发病人数占全球55%,列肿瘤相关死亡疾病的第二位,严重威胁人类健康。由于HCC具有早期症状隐匿、诊断率低、手术切除后复发和转移率(术后5年复发率约60-70%)高、病情进展快、预后差等特点,严重制约肝癌患者生存期的延长。因此,寻找能有效预测早期肝癌治疗后复发和转移的相关因素,并采取积极有效的干预措施,对延长肝癌患者生存期、改善预后至关重要。近年来涉及该领域的研究越来越多,但仍未有发现特异性强、敏感性高的预测肝癌患者治疗后复发及转移的指标。肝细胞癌的复发和转移是一个多因素、多步骤的复杂过程,有众多信号传导通路参与,其中受到人们关注较多的是HGF(hepatocyte growth factor,肝细胞生长因子)/c-Met (receptor tyrosine kinases,酪氨酸激酶受体)信号传导通路,在该通路中c-Met的表达是关键因素,研究证实c-Met能通过上调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和尿激酶类纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)的表达,最终影响肝癌的侵袭、转移和早期复发,因此该通路成为研究肝癌转移相关机制的热点。2009年Stein等人在结肠癌中发现一种新的结肠癌转移相关因子1 (metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1),其表达水平与结肠癌转移密切相关,临床研究结果显示MACC1可能成为预测结肠癌术后转移、复发的重要指标。在SW480结肠癌细胞培养中发现,MACC1可以诱导肿瘤细胞的转移、侵袭和增殖。在异体移植的模型上,MACC1可以诱导肿瘤细胞在肺、肝脏上出现转移;进一步研究发现MACC1在诱导肿瘤细胞转移、侵袭和增殖等机制与HGF/c-Met通路密切相关:首先,MACC1能上调c-Met的表达,增强HGF/c-Met信号的传导及作用发挥;另外还发现HGF可改变MACC1的细胞内定位,免疫荧光显示MACC1主要在SW480结肠癌细胞胞浆中表达,而加入HGF作用后,MACC1主要在胞核内表达。临床组织学研究也发现,结肠癌在没有出现转移时,MACC1仅出现在肿瘤细胞胞浆内;一旦MACC1在肿瘤细胞核内,经过多年随访后均出现远处转移。上述研究结果提示MACC1与HGF/c-Met之间存在一个正反馈环路:HGF促进MACC1由胞浆转移至胞核内,与c-Met的启动子结合,上调c-Met的转录,c-Met的表达可以增强HGF的作用。通过以上机制和相关信号传导途径,MACC1可以促进细胞的运动、侵袭、转移,最终促进结肠癌的转移和复发。在人类其他不同肿瘤上,如胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌和头颈部肿瘤等研究也发现均有MACC1表达,在恶性肿瘤组织(结肠癌原发灶和转移灶)中表达显著高于在正常组织(结肠黏膜、肝脏、腺瘤)中的表达。在肝脏中的研究发现,MACC1在正常肝脏组织和肝癌组织中均有表达,且肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织。但肝癌中MACC1的表达和HGF/c-Met信号通路、以及与肝癌复发、转移的关系,目前尚未见深入研究和报道。综上,为探讨MACC1的表达和HGF/c-Met信号通路变化在肝细胞癌复发与转移过程中的临床意义及相互作用关系,本研究将通过观察MACC1、HGF、c-Met在肝癌和非肿瘤肝脏组织中的表达,分析MACC1与肝癌分期、转移等临床特点的关系,评价其对肝癌转移、复发以及预后的预测价值。目的1.观察MACC1、HGF、c-Met在肝癌组织中的表达特点;2.分析MACC1与肝癌分期、复发、转移等临床特点的相关性,评价其在肝癌转移、复发以及预后的临床价值;3.探讨肝癌组织中MACC1与HGF/c-Met信号通路的相关性;方法选择2006年4月至2009年12月期间在302医院住院治疗的55例患者,包括50例HCC患者和5例非HCC患者(诊断肝囊肿或肝血管瘤,无肝炎或肝硬化病史)。HCC患者:男性44例,女性6例,年龄>50岁的33例,≤50岁的17例,平均年龄为50.3±11.7岁;有癌栓的21例,无癌栓的29例;肿瘤单发结节的27例,多发结节的23例;肝外转移的21例,无转移的29例;按巴塞罗那分期标准:早期15例,中期14例,进展期21例;病理证实均为肝细胞性肝癌,按Edmondson’s标准:高分化15例,中分化22例,低分化13例;AFP≤400ng/ml的28例,AFP>400ng/ml的22例;HBeAg阳性的14例,HBeAg阴性的36例;HBV DNA阳性的31例,HBV DNA阴性的19例;Child-Pugh A级的36例,B级的14例。术中取肝脏新鲜组织,部分保存于-80℃冰箱,部分放入福尔马林固定,石蜡包埋切片备用。从冰冻组织中提取总RNA,反转录成cDNA,通过Real-Time PCR的方法检测MACC1、HGF、c-Met mRNA在不同肝脏组织中的表达。对36例HCC患者(8例早期,6例中期,13例进展期)、7例肝硬化患者,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法检测病理切片中HGF、c-Met的表达。结果1. 11例肝癌和癌旁组织中,Real-Time PCR结果显示:MACC1 mRNA在癌旁组织中表达高于在癌组织中的表达(癌旁组织: -2.98±-3.07 vs癌组织: -3.28±-3.4,[Log2-ΔCt]P=0.041),HGF mRNA在癌旁组织中的表达高于癌组织中的表达(癌旁组织: -1.62±-2.03 vs癌组织: -1.93±-2.61,[Log2-ΔCt]P=0.01),而c-Met mRNA在癌组织中的表达高于癌旁组织中的表达,但未达到统计学差异(癌旁组织: -1.82±-1.88 vs癌组织: -1.63±-1.83,[Log2-ΔCt]P=0.155)。2. MACC1 mRNA表达与临床指标的关系:以MACC1 mRNA表达的中位数为界,将患者分为高表达组和低表达组,年龄≤50岁的在高表达组中占52%,在低表达组中占16%;有癌栓的患者在高表达组中占64%,低表达组中占20%;转移的患者MACC1 mRNA表达高于无转移的患者(P=0.035),转移的患者在高表达组中占60%,低表达组中占24%;进展期肝癌患者MACC1 mRNA表达高于早中期(P=0.022),进展期肝癌患者在高表达组中占60%,低表达组占24%;高表达组中高分化的占12%,中低分化占88%,低表达组中高分化占48%,中低分化占52%。MACC1 mRNA表达与年龄、癌栓、分期、转移、组织分化有关,与性别、肿瘤大小、肿瘤结节个数、AFP、肝硬化分级等无关。3. 29例早中期患者中,MACC1 mRNA低表达者无瘤生存期大于高表达者,高表达者中有70%(7/10)出现复发,60%(6/10)出现了转移,无瘤中位生存期为12月,低表达组仅有1例术后18个月出现复发。MACC1 mRNA和c-Met mRNA均低表达者无瘤生存期长于均高表达者。均高表达者中有60%(3/5)出现复发,无瘤中位生存期为7个月。4.免疫组化结果显示,c-Met在肝癌细胞膜表达阳性的患者占72%(26/36),癌旁组织肝细胞膜c-Met表达阴性;HGF在癌旁组织中表达阳性的占78%(28/36),HGF在癌组织中表达阳性的占39%(14/36)(P=0.005)。HGF与c-Met共同阳性表达的占28%(10/36),其中中低分化者占70%(7/10),肿瘤多发结节者占80%(8/10),转移的患者占60%(6/10)。5. MACC1 mRNA表达和c-Met蛋白表达具有53%(19/36)一致性。MACC1 mRNA表达和c-Met mRNA的表达具有46%(23/50)的一致性,MACC1 mRNA表达和HGF mRNA的表达具有66%(33/50)的一致性,三者在癌组织中的表达均高于在正常肝脏组织中的表达水平。结论1.肝癌组织中MACC1 mRNA表达增高提示HCC患者病情进展快,预后差。2.肝癌组织中MACC1 mRNA表达增高可作为早中期HCC患者术后的复发和转移的预测指标。3.肝癌中MACC1与HGF/c-Met信号通路可能具有一定的相关性。4.肝癌组织中HGF、c-Met蛋白共同表达的HCC患者预后差。