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目的:研究葫芦素B(Cucurbitacin B,CuB)对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用不同浓度的CuB处理骨肉瘤细胞,结晶紫染色、MTT和克隆形成实验检测细胞增殖能力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期;划痕愈合实验和Transwell小室法分析细胞迁移与侵袭能力;实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin和Snail等迁移与侵袭相关标志物的mRNA和蛋白水平;Western Blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin B1和细胞凋亡相关蛋白Bad、Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的表达;荧光素酶报告基因实验检测肿瘤相关信号途径的活性,Western Blot检测MAPK信号及AKT信号的变化。构建骨肉瘤异位移植瘤模型,观察瘤体生长情况,HE染色分析骨肉瘤肺转移情况,免疫组织化学染色分析Bcl-2、N-cadherin和PCNA表达及p-ERK水平。结果:CuB可抑制骨肉瘤细胞的增殖,使得细胞生长,克隆形成和PCNA的蛋白水平均降低;CuB可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭,使得划痕愈合率和Transwell细胞穿膜数减少,MMP2、MMP9、Vimentin、Snail和N-cadherin的mRNA和蛋白水平下调,而E-cadherin蛋白水平上调;CuB可使骨肉瘤细胞周期阻滞在G2/M期,周期蛋白Cyclin B1表达水平明显下调,细胞的凋亡率显著增加,凋亡相关蛋白Bax、Bad、cleaved Caspase-3和cleaved PARP的表达上调,而Bcl-2的蛋白水平下调;CuB能抑制143B细胞中AKT信号通路和MAPK信号通路,使得p-ERK、p-p38、p-AKT等蛋白的表达均减少。体内实验证实,CuB能抑制荷瘤裸鼠模型中骨肉瘤的生长;肺组织切片HE染色显示,CuB处理组肺转移减少;IHC染色结果表明,CuB能下调PCNA、N-cadherin、Bcl-2和p-ERK的表达。结论:CuB能抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡,其抑制作用可能与CuB抑制骨肉瘤细胞中AKT和MAPK信号通路有关。