【摘 要】
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该研究根据GenBank中已发表的人GnRH2基因mRNA序列以及转运肽(transporter,TRS)基因核苷酸序列,借助Oligo4.1设计了一对寡核苷酸引物,以引物3末端的短互补序列退火形成小段双
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该研究根据GenBank中已发表的人GnRH2基因mRNA序列以及转运肽(transporter,TRS)基因核苷酸序列,借助Oligo4.1设计了一对寡核苷酸引物,以引物3末端的短互补序列退火形成小段双链,从而互为模板和引物,通过引导合成长达90bp的GnRH/TRS序列GnRH/TRS.其其克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pYC1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,进一步的序列分析确认其中GnRH/TRS序列的正确性.pYC1经BamHI和EcoRI酶切得到GnRH/TRS片段,然后将此片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pYC2.经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC2,并转化到大肠杆菌BL21(ED3)plyS实现原核表达.IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的约28ku的融合蛋白,光密度扫描表达产物进行初步定量,表达产物约占菌体总蛋白的33.3﹪.表达产物经谷胱甘肽琼脂糖4B亲和层析纯化后,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白.为进一步科研和实际应用奠定基础.
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