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第一部分宫内感染/炎症致大鼠胎盘血管损伤动物模型的建立与鉴定目的建立宫内感染/炎症致大鼠胎盘血管损伤大鼠动物模型,并鉴定模型的建立是否成功。对象与方法宫内感染/炎症模型制备:选取12只受孕的SD大鼠随机分为两组。脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)组6只:腹腔注射LPS(10mg/20ml):剂量为0.79mg/kg(1.58ml/kg);对照组6只:腹腔注射无菌生理盐水1.58m L/kg。分别在孕期第8、10、12天进行腹腔注射。胎鼠于孕第21天剖宫娩出。记录胎鼠存活情况和新生大鼠体重、身长等一般情况。留取胎盘,HE染色法分析胎盘病理。采用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞,观察胎盘血管形态,并用体视学方法对胎盘血管密度进行分析。结果1.LPS组孕鼠娩出吸收胎/死胎率(10.1%)高于对照组(1.4%),LPS组胎鼠出生体重(5.70±0.67)g低于对照组(6.36±0.48)g。2.胎盘病理:HE染色显示LPS组胎盘绒毛间质水肿,炎性细胞浸润明显,滋养细胞浸润异常。胎盘血管染色提示LPS胎盘组织中血管坏死增多。3.胎盘血管密度检测:LPS组与对照组比较,胎盘总血管密度显著减少[(580±86)mm-2 vs(742±18)mm-2,p<0.01]。结论宫内感染/炎症可致大鼠胎盘血管密度减低,本研究建模成功。第二部分Wnt5a在宫内感染/炎症所致大鼠胎盘血管损伤中的作用研究目的通过检测以上宫内感染/炎症模型孕鼠胎盘Wnt5a及其下游因子flt-1、Ca MKII、PKC的表达,并计算其与胎盘血管密度相关性,探讨Wnt5a在宫内感染/炎症所致的胎盘血管损伤中的作用。对象与方法使用免疫印迹(Western Blotting)和免疫组化法检测LPS组和对照组胎盘Wnt5a及其下游因子flt-1、Ca MKII、PKC蛋白的表达,Western Blotting以相对灰度值表示,免疫组化结果以光累积密度值(Integrated optic density,IOD)表示,并通过回归分析,计算其与胎盘血管密度的相关性。结果1.LPS组大鼠胎盘Wnt5a及其下游因子flt-1、PKC、Ca MKII蛋白相对灰度值高于对照组(Wnt5a蛋白相对灰度值:1.17±0.18 vs 0.56±0.20,p<0.01;flt-1蛋白相对灰度值:2.44±0.37 vs 1.20±0.17,p<0.01;PKC蛋白相对灰度值:0.92±0.16 vs0.41±0.09,p<0.01;Ca MKII蛋白相对灰度值:2.95±2.56 vs 0.99±0.26,p<0.01),差异有统计学意义;LPS组胎盘Wnt5a及其下游信号因子flt-1、PKC、Ca MKII的IOD值均高于对照组(Wnt5a IOD值:13525.9877±4849.4737 vs1788.7488±1600.6925,p<0.01;flt-1 IOD值:11161.4057±6141.9840 vs2909.209±1669.7914,p<0.01;PKC IOD值:12302.2341±5192.7842 vs5923.201±1689.7862,p<0.01,Ca MKII IOD值:11161.4057±6141.9840 vs 4219.206±1579.7104,p<0.01),差异有统计学意义,说明宫内感染/炎症胎盘Wnt5a及其下游因子flt-1、Ca MKII、PKC表达显著上调。2.相关性分析:胎盘Wnt5a蛋白表达量与胎盘血管密度呈显著负相关(r=-0.89,p<0.01);胎盘flt-1蛋白表达量与胎盘血管密度呈显著负相关(r=-0.92,p<0.01);结论Wnt5a及其下游因子flt-1的表达与宫内感染/炎症所致胎盘血管密度存在负相关,提示在宫内感染/炎症情况下,胎盘Wnt5a及其下游因子flt-1表达上调,抑制血管新生,参与血管损伤的发生发展。