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第一部分缺氧／复氧培养下HIF-1α、VEGF在Walker-256细胞中表达目的：观察氯化钴（CoCl2）诱导缺氧／复氧情况下HIF-1α及VEGF在Walker-256细胞中的表达及调节机制。方法：Walker-256细胞株接种于含10％小牛血清的RPMI-1640培养基中，先用MTT法检测不同浓度CoCl2对肿瘤细胞生长抑制率，根据不同浓度CoCl2抑制肿瘤细胞生长的量一效关系，确定CoCl2工作浓度100μmol／L。实验分为两组，一组为单纯缺氧组：选取CoCl2干预诱导细胞化学缺氧后4h，8h进行观测；另一组为缺氧后模拟复氧组，即在CoCl2干预诱导细胞化学缺氧后4h，8h后，换用不含CoCl2的培养液继续培养8h和24h后进行检测。显微镜下观察化学缺氧和复氧后不同时间细胞形态学变化；采用半定量RT-PCR及Western blot分折缺氧、复氧不同时间点HIF-1α／VEGF mRNA与蛋白含量变化。结果：在氧化钴模拟化学缺氧实验中，光镜结果显示细胞缺氧损伤逐渐加重，HIF-1α和VEGF表达明显增加。HIF-1αmRNA在化学缺氧后4h，HIF-1α蛋白表达在化学缺氧后8h达高峰；VEGF mRNA和蛋白表达则在化学缺氧后8h同时达到高峰。在模拟复氧实验中，细胞形态学改变显示化学复氧8h细胞损伤最为严重，而HIF-1α和VEGF表达在化学复氧8h均明显下降，24h后降至与正常培养相似水平。HIF-1α蛋白与VEGF mRNA表达具有良好相关性。结论：缺氧是VEGF过度表达的始动因素之一。缺氧通过影响HIF-1蛋白表达，调控下游靶基因VEGF转录。HIF-1对肿瘤细胞缺氧、复氧损伤具有保护作用。第二部分肝动脉阻断对大鼠种植性肝癌的HIF-1α及VEGF表达的影响目的：探讨肝肿瘤行肝动脉栓塞术后肿瘤复发转移的分子生物学机制。方法：24只Wistar大白鼠肝左叶种植Walker-256肿瘤后随机分为两组，每组12只，于肿瘤植入后第8天行肝动脉结扎（HAL组）和单纯开腹（对照组）手术。术后第1、3、7、12天各处死三只大鼠，取出肝肿瘤，分别采用RT-PCR检测缺氧诱导因子—1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA，免疫组织化学染色检测HIF-1α、VEGF蛋白表达。采用图像分析系统计算HIF-1α及VEGF相对含量。医学SPSS软件作统计学分析。结果：肝动脉结扎术后第1、3天，HAL组的HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达显著高于剖腹对照组（P＜0.05）。术后第7、12天，HIF-1α与VEGF表达两组间无显著性差异（P＞0.05）。HAL组中，HIF-1α与VEGF蛋白表达具有良好相关性（P＜0.05）。结论：肝动脉结扎术后，肿瘤组织在缺血缺氧状态下，HIF-1与VEGF蛋白表达增加。第三部分肝动脉栓塞术后大鼠种植性肝癌肺转移与HIF-1α的相关性研究目的：探讨肝肿瘤行肝动脉栓塞术后肿瘤转移的发生及其分子生物学机制。方法：39只Wistar大白鼠种植Walker-256肿瘤植入后第8天随机分为三组，行肝动脉结扎（HAL组，15只）、肝动脉栓塞（HAE组，9只）和单纯开腹手术（对照组，15只）。术后第12天处死全部大鼠，切取肿瘤及双肺，评估肿瘤体积和肿瘤生长抑制率，观察肿瘤坏死程度，采用肉眼及显微镜评估肺转移情况。免疫组织化学染色检测HIF-1α蛋白表达。结果：与对照组相比，HAL组、HAE组的肿瘤体积明显缩小，P＜0.01，HAE组肿瘤体积较HAL组进一步缩小，差异具有统计学意义，P＞0.05。与对照组相比，HAL组与HAE组肿瘤坏死程度明显加重，P＜0.05。各组间肺转移率差异无统计学意义，P＜0.05。HAL组共3只大鼠观察发现肺转移病灶，HAE组中两只大鼠观察发现肺转移病灶而剖腹对照组仅1只发现肺转移结节。结论：经导管动脉栓塞术在控制肿瘤体积，促进肿瘤的坏死同时，对肺转移率发生发展无明显控制作用。残存的肿瘤组织通过HIF-1通路适应缺氧微环境，进而诱发肿瘤转移。