含锌煅烧牛骨的制备及成骨能力的研究

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牙周病引起牙体脱落、牙槽骨低平以至于需要植骨,植骨材料的研究是个热门,好的植骨材料既能够好的成骨能力也必须满足局部受力的要求。目的:将锌离子与煅烧骨(ceramic bovine bone CBB)进行结合,制备CBB/Zn2+复合支架材料,以求改善CBB的力学性能及成骨能力,为寻求更好的骨支架材料提供实验室基础。材料和方法:将购置的胎牛骨进行多次煅烧后,获得CBB/Zn2+复合支架材料,(1)使用XRD、SEM、EDXI以及INSTRON万能力学仪等检测手段,对材料孔径大小、孔隙率、主要成分、锌离子的含量及材料的力学性能进行对比研究。(2)从新西兰2周龄的幼兔体内提取BMSCs,并对所提取的细胞进行成骨、成脂诱导分化后进行特征性染色,以确保获得的细胞为就纯净的干细胞。(3)将CBB/Zn2+浸泡于完全培养基获得材料的浸提液,再使用浸提液对材料的细胞毒性进行检测;将CBB/Zn2+与细胞共同培养,检测细胞的粘附率并用SEM观察细胞与材料粘附的情况;将细胞接种于CBB/Zn2+表面培养14天后,收集细胞,定量分析成骨细胞分泌表达的ALP蛋白,并运用RT-PCR统计分析成骨相关基因(Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)、骨钙素(OPN)及骨桥蛋白(OCN))的表达量。(4)以兔子的下颌骨为手术区,人工制造骨缺损模型,给骨缺损区域分别置入CBB/Zn2+、CBB以及医药级纳米HAP,观察骨缺损修复的情况,并利用Micro-CT检测新生骨量及材料的降解率,以探讨材料在体内的成骨能力。结果:(1)CBB的主要成分为?-TCP,CBB/Zn2+的锌含量为0.32 wt%,孔径大小为123~346μm孔隙率约70%与CBB相比较有所提高但是不显著(P>0.05),而材料的力学性能比CBB有显著的提高(P<0.05)。(2)CBB/Zn2+属于无毒性材料,SEM观察下,细胞可以与有很好的与材料结合,在促进成骨分化方面,ALP的表达量有所提高但是不显著(P>0.05),而成骨相关基因的表达明显加强(P<0.05)。(3)动物实验4 w、8 w、12 w肉眼观察,CBB/Zn2+组修复区愈合比CBB组愈合更好更早,新生骨量也都比CBB组高,而材料的降解二者无明显差异。HAP粉组,4 W时骨缺损愈合及新生骨量都最为突出,而到了8 w、12 w时,由于缺损区域过大,中心区营养供应不足以至于发生坏死。结论:CBB/Zn2+有很好的生物相容性,材料的机械性能增强,能有效的促进BMSCs向成骨细胞方向分化,并促进成骨相关蛋白的分泌及成骨相关基因的高表达,植入动物体内同样能够很好促进骨缺损修复。
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