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目的:建立稳定、高表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的胰腺癌裸鼠移植瘤转移模型,采用整体荧光成像系统实时监测肿瘤的生长、转移及微转移的发生,从而为人胰腺癌尤其是其侵袭与转移的恶性生物学特性的研究提供了更为理想的动物模型。
方法:以慢病毒作为载体将RFP基因转入人胰腺癌细胞株SW1990和CFPAC-1,经梯度浓度G418筛选后96孔板有限稀释法获得稳定、高表达RFP的单克隆细胞系SW1990-RFP和CFPAC-1-RFP。并通过形态学观察、细胞周期、细胞体内外生长曲线等评价转染后细胞生物学行为的变化。采用皮下注射荧光细胞SW1990-RFP建立人胰腺癌皮下移植瘤模型、通过外科手术原位移植皮下荧光肿瘤组织小块建立原位移植瘤自发转移模型、采用尾静脉注射SW1990-RFP建立实验性肺转移模型和脾脏注射SW1990-RFP建立实验性肝转移模型。应用整体荧光成像系统评价各组转移模型肿瘤转移及微转移的发生。
结果:RFP标记的人胰腺癌细胞SW1990-RFP和CFPAC-1-RFP在荧光显微镜下发出强烈均匀的红色荧光,RFP可在体内、外持续稳定表达而且荧光无明显衰减。转染前后细胞形态学、细胞周期、细胞体内外生长曲线等生物学行为无明显改变。应用荧光细胞SW1990-RFP成功建各种胰腺癌移植瘤转移模型,应用整体荧光成像系统可以实时监测皮下移植瘤和原位移植瘤的生长状况。在原位移植瘤自发转移模型组中成功的检测到肝脏、肺脏、网膜和腹膜转移及微小转移的发生。在实验性转移模型组中成功的检测到肝脏和肺脏的微小转移。
结论:成功建立稳定高表达RFP的人胰腺癌单克隆细胞系SW1990-RFP和CFPAC-1-RFP。应用人胰腺癌荧光细胞SW1990-RFP成功建立胰腺癌裸鼠原位移植瘤白发转移模型和实验性肺、肝转移模型,通过整体荧光成像系统可以实时监测原位移植瘤的发生、发展过程,在早期就能够敏感地检测剑脏器微小转移的发生。