论文部分内容阅读
卵母细胞或胚胎在体外培养时得不到母体抗氧化剂的保护，产生的氧自由基会对卵母细胞的成熟及胚胎的发育产生抑制作用，这是制约卵母细胞体外培养效果的因素之一。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是天然的抗氧化剂，且无毒副作用，是体外培养体系的一种理想的抗氧化添加成分。本实验以新西兰白兔为动物模型，对其进行超数排卵处理后，采集COCs进行体外成熟培养。在TCM-199基础培养体系中通过添加不同浓度的EGCG（0μM、10μM、15μM、20μM和25μM）来研究其对新西兰兔卵母细胞体外成熟的影响，旨在改善兔的体外成熟培养体系，提高兔卵母细胞体外培养的效果。同时，采用实时荧光定量PCR技术，检测了幼龄兔卵母细胞成熟过程中BMP-15基因、FSHR基因的相对表达丰度，探讨了BMP-15基因、FSHR基因对卵母细胞体外成熟的影响，为进一步研究兔BMP-15基因、FSHR基因在生殖系统中所发挥的作用及其生殖生物学功能提供理论依据。本研究结果如下:
1.在TCM-199基础培养体系中添加不同浓度的EGCG(0μM、10μM、15μM、20μM和25μM)，结果显示，随着EGCG添加浓度的升高，卵母细胞成熟率不断提高，当添加浓度为15μM和20μM时，其对卵母细胞的成熟有明显的促进作用，差异显著(P＜0.05);但当EGCG添加过量时，卵母细胞的成熟率显著降低。对于幼龄兔，添加15μM和20μM相比，效果差异不显著(P＞0.05);但是，对于成年兔，添加20μM要明显优于15μM，差异显著(P＜0.05)。
2.幼龄兔卵母细胞体外成熟率总体上低于成年兔，差异不显著（P＞0.05）;当添加15μM、25μMEGCG时，幼龄兔卵母细胞体外成熟率却高于成年兔，但差异也不显著(P＞0.05)。
3.通过实时荧光定量PCR检测发现，BMP-15基因、FSHR基因在幼龄兔卵母细胞成熟发育的不同阶段中有不同的表达量。对于BMP-15基因，在未成熟卵母细胞中表达水平较低，随着培养时间的推移，其表达量逐渐升高，在培养12h时出现表达量的峰值，并且此后一直维持较高的表达量，直至24h，随后下降。这与COCs成熟过程中卵丘细胞的扩散相一致，推测BMP-15基因对于卵丘细胞的扩散有重要作用。对于FSHR基因，在未成熟卵母细胞中有较高表达，0h、6h、有较高的表达量，随后逐渐下降;这可能与卵泡发育初期需要更多的FSH刺激有关，表明FSHR基因对于卵泡发育及卵母细胞的成熟具有重要作用。
4.在幼龄兔卵母细胞成熟发育的全过程中，BMP-15基因、FSHR基因的相对表达量呈逆向的动态变化趋势，BMP-15能够抑制FSHR的表达，对FSHR具有负向调控作用。