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目的本研究通过改进蛋白质的分离技术来提高蛋白的质谱鉴定水平,并运用改进的蛋白质组学技术来探索乙肝相关性肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者体内的差异表达蛋白。对筛选出的差异表达蛋白应用商品化试剂盒进行临床验证,评价其单独与联合检测对HCC早期诊断的诊断效能,探索能够对HCC进行早期诊断的新肿瘤标志物。方法收集2014年1月-2015年2月就诊于天津市第三中心医院肝胆外科及消化内科并被诊断为乙肝相关性HCC患者血清样本60例,乙肝肝硬化患者血清样本70例,慢性乙肝肝炎患者血清样本70例和在天津市第三中心医院预防保健科进行常规体检的健康人血清样本50例。采用纳升级高效液相色谱与质谱(nano HPLC-MS)技术对血清样本进行前期处理和分析鉴定,再运用美国OMMSA软件进行蛋白质鉴定及相对表达量分析,筛选出差异表达蛋白。然后再应用商品化试剂盒对已筛选出的3种差异表达特征蛋白进行临床验证,验证比较乙肝相关性HCC组与健康体检组、乙肝相关细胞肝癌组与慢性乙型肝炎组、乙肝相关性HCC组与乙肝肝硬化组和乙肝相关性HCC组内应用上述特征蛋白单独检测和联合检测对HCC早期诊断的价值,期待寻找出能够检测出早期HCC的潜在肿瘤标志物。结果(1)采用改进的蛋白质组学技术,即先应用自主修饰Self-owned胰蛋白酶对血清中提取出的蛋白质进行酶解,然后运用强阳离子交换与反相C18二维一体毛细管色谱柱进行分离,使用LTQ Orbitrap XL质谱对蛋白进行准确定量,再通过美国OMSSA软件强大的数据处理最终鉴定出3578种蛋白。(2)通过统计分析筛选10个与肝脏肿瘤相关差异表达蛋白,对其中表达上调和下调比较明显的四种(A1BG、AT-Ⅲ、VTN和AFP)进行临床验证,显示A1BG、AT-Ⅲ临床结果与质谱分析结果相符,并且具有较高的临床诊断效能,而VTN则需要研究进一步探讨其机制。(3)在健康体检中,可以优先选用A1BG作为肝癌标志;在鉴别诊断HCC与慢性乙型肝炎时,可以选择AFP和AT-Ⅲ联合检测,其诊断效能较高;在肝癌与肝硬化鉴别中,应优先考虑AFP与A1BG联合检测以提高诊断效能。结论应用自主修饰的胰蛋白酶提高了蛋白酶解效率,二维一体色谱柱技术将强阳离子和C18反相液相色谱有机整合消除了样本污染,使得实验的重复性和鉴定的灵敏度在整体上得到了显著提高,利用改进的技术与合理的统计学分析方法,我们最终成功筛选出可以用于HCC早期诊断和病程监测的差异表达特征蛋白。对几种差异表达特征蛋白单独和联合检测的诊断效能进行评价,适当的组合诊断可提高鉴别肝病患者中肝癌潜伏的能力,为临床医生赢得宝贵的诊治时间,提高肝癌患者的存活率。