针刺干预弱视的临床及视皮层肌动蛋白重排与突触的研究

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目的:观察针刺对儿童弱视的治疗作用;研究针刺对单眼形觉剥夺大鼠行为学视力的干预作用;探讨在视觉发育敏感期,视皮层肌动蛋白重排与突触密度出现不同变化趋势的原因。方法:实验包括三部分。第一部分:针刺疗法对儿童弱视治疗效果的观察。选取2016年5月至2017年5月来我院就诊的弱视儿童进行治疗效果的观察,根据治疗方式的不同分为常规治疗组和常规治疗+针刺组。常规治疗+针刺组在常规治疗的基础上增加针刺治疗。第二部分:针刺干预对单眼形觉剥夺弱视大鼠的行为学视锐度的影响。实验动物为出生后13日、30日和180日龄的健康SD大鼠,大鼠出生后的第13天,建立单眼形觉剥夺弱视大鼠模型,后随机分为2组:弱视模型组和弱视+针刺干预组。在大鼠出生后30日对大鼠进行针刺干预,出生后60日,利用行为学视锐度评估对弱视模型组和弱视+针刺干预组动物弱视眼的视力进行测试。由于进行行为学视力测试所需时间较长,实验完成时大鼠为180日龄。第三部分:视皮层肌动蛋白重排与突触密度出现不同变化趋势的机制。我们通过之前的的研究发现:大鼠出生后45日和30日相比,视皮层突触密度的差异无统计学意义,肌动蛋白细胞骨架结构重塑在突触的形态结构及功能上发挥重要作用,但肌动蛋白重排却明显下降。造成突触密度变化和肌动蛋白重排在出生后30日和出生后45日不同变化趋势的机制仍不清楚。SD大鼠,分为15日组、30日组及45日组(每组18只动物)。利用透射电子显微镜技术(TEM)检测视皮层双眼投射区(V1B区)突触密度的变化;通过免疫印迹法(Western blot)检测初级视皮层(视皮层V1区)PSD-95蛋白表达的变化。结果:一、通过对临床弱视儿童治疗效果的观察,发现常规治疗组总有效率为72.2%,常规治疗+针刺组为92.3%。两组总有效眼数的差异有统计学意义(X2=150.000,P=0.000);常规治疗+针刺组疗效明显优于常规治疗组,其差异有统计学意义(u=3.097,P=0.000)。二、利用行为学视锐度评估对弱视模型组和弱视+针刺干预组动物弱视眼的视力进行测试,发现弱视+针刺干预组弱视眼的视锐度明显提高,与弱视模型组弱视眼相比差异有统计学意义(t=-5.227,P=0.000)。三、利用TEM检测视皮层V1B区突触密度的变化;通过免疫Western blot检测视皮层V1区PSD-95蛋白表达的变化,发现45日组和30日组相比,V1B区突触密度变化的差异无统计学差异(t=0.477,P>0.05);视皮层V1区PSD-95蛋白表达变化的差异无统计学意义(单因素方差分析:F(2,6)=7.606,P<0.05;P30 vs.P15,P<0.05;P45 vs.P15,P<0.05;P45vs.P30,P>0.05)。结论:1.针刺对于弱视具有极好的治疗作用,配合使用其它疗法,能明显的提高弱视的治疗效果。2.首次将以视觉水箱任务为主的动物行为学视锐度评估方法应用到针刺治疗形觉剥夺性弱视大鼠的实验研究中,发现针刺干预可以提高弱视动物弱视眼的视力,为以后分子实验的研究打下了坚实的基础。3.在视觉发育的敏感期,肌动蛋白重排和突触密度之间的变化虽然相关,但不完全等同。肌动蛋白重排在反映细胞功能变化的同时,也反映突触结构可塑性。此外,虽然目前关于在视觉发育的敏感期内,大鼠的初级视皮层是否存在突触修剪的过程还没有定论;我们可以推测突触修剪过程可能发生,并在使视神经及外侧膝状体向视皮层的投射更加精准中发挥重要作用。
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