一株产赤藓糖醇酵母的鉴定及其赤藓糖还原酶基因的克隆与分析

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赤藓糖醇(Erythritol),即1,2,3,4-丁四醇(C4H10O4),具有甜味纯正、热量值低、稳定性高、耐受量高等性质,在食品、医药、化妆品、化工等多个领域都具有广阔的应用前景。目前工业化生产赤藓糖醇的主要方法是采用酵母发酵。本研究围绕着前期分离出的一株产赤藓糖醇酵母——菌株BH010展开,探讨了其培养特性、形态学特征以及生理生化特征,根据rDNA序列对其进行鉴定,并克隆了其赤藓糖还原酶基因。在30%葡萄糖、1%酵母膏培养基中,30℃,150rpm,摇瓶培养8d,用高效液相色谱法分析发酵液的组分,结果表明菌株BH010的主要发酵产物为赤藓糖醇,此外还有少量副产物,包括甘油和核糖醇。采用扫描电子显微镜观察发现,在液体培养基中细胞呈现椭圆形,细胞平均大小约5×10μm,单个或者多个呈链状排列,细胞顶端有出芽现象,而在固体培养基中则观察到长条状的假菌丝,假菌丝顶端有钝圆形的芽生分生孢子。此外,还通过糖发酵、碳源同化、氮源同化等试验探讨了生理生化特征。采用PCR的方法扩增出菌株BH010的18S rDNA、26S rDNA D1/D2区和ITS/5.8S rDNA三段序列,Genbank登录号分别为:JQ798179,JQ798180和JQ798181;利用BLAST软件做同源性分析,结果表明菌株BH010属于丛梗孢属(Moniliella),并将其命名为Moniliella sp. BH010。赤藓糖还原酶是酵母赤藓糖醇合成途径中的关键酶。本研究采用PCR方法扩增出菌株BH010的两段赤藓糖还原酶基因序列,Genbank登录号分别为JQ798182和JQ798183,同时还扩增出其对应的cDNA序列。将DNA和cDNA序列进行对比分析,结果表明菌株BH010的两段赤藓糖还原酶基因中均有内含子存在。根据赤藓糖还原酶基因序列,推导出对应的氨基酸序列,进行多重比对,结果发现菌株BH010的两种赤藓糖还原酶与Trichosporonoidesmegachiliensis SNG-42的赤藓糖还原酶具有很高的同源性,与醛糖还原酶超家族具有很高的同源性。本研究报道了一株独特的产赤藓糖醇酵母及其rDNA序列,为酵母的分类学研究提供基础;首次克隆出丛梗孢酵母的赤藓糖还原酶基因,并且首次报道了其中的内含子,为理解酵母的赤藓糖醇合成路径提供理论依据。
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