论文部分内容阅读
目的:1、观察氯化高铁血红素(Hemin)诱导的血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1, HO-1)对离体星形胶质细胞(Astrocytes, AC)的损伤情况及各组AC中JNK、p38、ERK1/2、Bcl-2、Bax等蛋白表达变化规律。2、进一步探讨HO-1对离体星形胶质细胞AC损伤的相关机制。
方法:选取新生24h内的SD大鼠大脑皮层新鲜脑组织,参照McCarthy等方法加以改进,体外培养及纯化培养获得AC,采用神经胶质纤维酸性蛋白(glia fibrillary acid protein, GFAP)免疫荧光鉴定AC,将AC分为正常对照组(C组)、诱导剂Hemin组(H组)及Hemin+锌原卟啉(Zinc protoporphyrin, Zn-PPIX)组(HZ组)。倒置显微镜及Hoechst33342观察细胞的形态学变化;Cell Counting Kit-8(CCK-8)及流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测细胞的活力变化及细胞凋亡情况:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-1的mRNA含量:免疫印迹法(Western blot)检测HO-1、Bcl-2、Bax、p-p38、p38、p-JNK、JNK、p-ERK1/2、ERK1/2等蛋白的表达变化。
结果:1、GFAP免疫荧光染色鉴定显示纯化的细胞97%以上为AC。2、H组及HZ组在倒置显微镜下部可见星形胶质细胞胞体皱缩、变圆、突起细短、折光率明显增强及部分细胞脱壁,但HZ组形态学变化相对较轻。进一步通过Hoechst33342染色可见这两组细胞胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染,HZ组细胞较H组相比致密浓染或碎块状致密浓染的胞核数目明显减少。3、CCK-8法及流失细胞仪检测显示H组及HZ组细胞存活率较C组显著下降,凋亡率明显上升(P<0.001):而HZ组与H组相比,存活率上升,凋亡率明显下降,且都具有统计学意义(P<0.01)。4、Western blot及RT-PCR法检测HO-1表达情况示:与对照组相比,H组及HZ组HO-1的表达明显增多,且具有统计学意义(P<0.001);而HZ组与H组比较,HO-1的表达下降,但P>0.05,无统计学意义。进一步结果显示:Hemin可以明显上调Bax、p38、p-JNK及p-ERK1/2等蛋白表达,下调Bcl-2等蛋白表达:而Zn-PPIX可减弱Hemin的上述作用。
结论:1、Hemin诱导的HO-1对星形胶质细胞具有损伤作用,可加速其凋亡过程,而Zn-PPIX可以部分逆转上述损伤。2、p38、JNK、ERK1/2等MAPKs家族及Bax、Bcl-2等可能参与了Hemin诱导HO-1对星形胶质细胞的损伤过程。