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目的1.检测泪腺腺样囊性癌(ACC)组织中胶质源性神经营养因子(GDNF), GDNF家族受体α1(GFRα-1)、酪氨酸激酶受体(Ret)和神经细胞粘附因子(NCAM)以及凋亡抑制蛋白(Survivin)的表达,并观察其与泪腺ACC组织嗜神经侵袭(PNI)等生物学行为之间的关系,以及彼此之间的相关性。2.研究GDNF对体外培养人腺样囊性癌细胞(ACC-2)增殖和迁移的影响,为进一步明确GDNF在泪腺腺样囊性癌PNI机制提供实验依据。3.分别探讨人腺样囊性癌细胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白质和]mRNA表达的相关性,进一步了解它们在泪腺ACC PNI微环境中的相互作用与关系,为临床寻找控制早期PNI的有效靶点提供参考依据。方法1.免疫组织化学SABC法检测51例泪腺ACC患者手术标本和5例正常泪腺组织中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表达状况。2.通过MTT法、绘制细胞生长曲线,以及流式细胞术检测不同浓度(时间)的GDNF对人腺样囊性癌细胞(ACC-2)增殖和凋亡的影响；Transwell小室法研究不同浓度(时间)的GDNF对人腺样囊性癌细胞(ACC-2)迁移能力的影响。3.分别通过(?)Vestern Blotting蛋白印迹法和RT-PCR法检测一定浓度的GDNF对人腺样囊性癌细胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM以及Survivin蛋白质和]nRNA表达的影响。结果1.泪腺ACC组织中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表达率依次为62.7%(32/51)、62.7%(32/51)、54.9%(28/51)、60.8%(31/51)、60.8%(31/51),显著高于泪腺正常组织；实体型ACC、复发组ACC的嗜神经侵袭率显著高于腺样-管状型ACC、原发组ACC的嗜神经侵袭率,差别具有统计学意义(P<0.05),有/无疼痛组ACC间嗜神经侵袭率的差异无统计学意义(P>0.05)。2.实体型ACC组织中NCAM、Survivin的表达率显著高于其在腺样-管状型ACC组织中的表达率,复发组ACC组织中GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表达率显著高于其在原发组ACC组织中的表达率,有嗜神经侵袭组ACC中GDNF GFRα-1、Ret、NCAM的表达率显著高于其在无嗜神经侵袭组ACC中的表达率,上述差别均具有统计学意义(P<0.05)。3.泪腺ACC组织中GDNF的阳性表达与GFRα-1、Ret、NCAM的阳性表达均具有明显相关性,GDNF的阳性表达与Survivin的阳性表达无明显相关性。4.标准培养48h,GDNF浓度在20～120ng/ml之间,可促进ACC-2细胞系的增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),其中,80ng/ml的GDNF促进ACC-2增殖作用最明显。在第72h,80ng/ml GDNF促进ACC-2细胞系的增殖作用最显著(P<0.05)。上述结果与80ng/ml GDNF作用下的ACC-2细胞生长曲线的趋势一致。5.标准培养48h后,应用流式细胞仪检测,80ng/ml GDNF干预组ACC-2细胞中的G1期ACC-2细胞比例较对照组减少,S期ACC-2细胞比例较对照组增加。6.标准培养40h, GDNF在60～160ng/ml浓度下促进ACC-2细胞迁移(P<0.05),其中,160ng/ml的GDNF促进ACC-2迁移作用最强。从第24h起,100ng/ml GDNF在各时间点(24h,30h,40h)均可明显促进ACC-2细胞系迁移,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。7.80ng/ml GDNF能够一致性上调ACC-2细胞的GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白质和(?)m RNA的表达,下调了ACC-2细胞中GDNF m RNA和蛋白质的表达。结论1.泪腺ACC具有嗜神经侵袭性生物学行为,嗜神经侵袭现象可作为泪腺ACC预后不良的临床观察指标之一。2. GDNF、GFRα-1、Ret在泪腺ACC嗜神经侵袭中发挥重要作用,三者可以作为判断有无嗜神经侵袭现象的生物学指标,而后两者有望成为预测及评估预后的因素之一。3. GDNF可以促进体外培养的人ACC-2细胞的增殖和迁移能力,并且分别具有剂量和时间依赖性,但是GDNF对ACC-2细胞的凋亡水平无明显的调控作用。4. GDNF通过GFRα-1-Ret信号传导途径,或者通过NCAM这一非依赖Ret的信号途径,沿着以周围神经为中心的GDNF的浓度梯度,以及凭借NCAM的异/同嗜性粘附作用,使得泪腺ACC组织与周围神经相互吸引,形成了有利于肿瘤嗜神经侵袭的微环境,增强了泪腺ACC肿瘤细胞的神经侵袭能力。5. NCAM的高表达与泪腺ACC的病理类型相关,同时成为判断泪腺ACC嗜神经侵袭行为与预后的指标,通过检测NCAM在泪腺ACC肿瘤细胞周围的表达,特别是在肿瘤周围神经中的表达,了解泪腺ACC嗜神经侵袭的情况,可能发现肿瘤细胞的残留或早期的神经侵犯,以期指导临床治疗。6. Survivin的表达与泪腺ACC的病理类型、预后密切相关,却与泪腺ACC的嗜神经侵袭现象无明显的相关性；Survivin与GDNF可能具有促进ACC-2细胞增殖的协同作用。