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1.研究背景心脏自主神经在心血管疾病的发生发展中起着重要的作用。经皮迷走神经刺激(T-VNS)术能有效抑制房颤的发生发展,因此推测T-VNS术有望成为治疗相关心血管疾病的方便、安全的新技术。但其有效的耳廓刺激部位以及神经机制尚不清楚。阿卡西汀是一种可以特异性抑制心房肌钾离子电流,但不延长心室QT间期的新型房颤治疗药物,具有良好的研发前景。有关该药物对心肌细胞群之间的传导研究极少。而且,T-VNS术治疗房颤的作用机制与阿卡西汀有相似之处,两者是否有协同作用尚未明确。2.研究目的(1)为T-VNS术确定有效的耳廓刺激位点,探讨电刺激耳廓不同部位对心脏迷走神经的调节效果及其机制。(2)探讨低强度经皮迷走神经刺激(LL-TVNS)对阿卡西汀治疗心房颤动的影响。3.研究方法(1)对24只SD雄性大鼠的耳屏、耳甲、耳轮分别以不同强度(0-16mA)和不同时间(0-15 min)进行电刺激,观察大鼠心电图中心率变化。一周后,将24只大鼠随机分为耳屏注射组(n=6)、耳甲注射组(n=6)、耳轮注射组(n=6)和空白对照组(n=6)。前三个实验组均在大鼠右侧耳廓相应部位注射2μLAlexa Fluor 555共轭结合的霍乱毒素B亚单位(CTB-AF555),空白对照组在右侧耳屏处注射2 μμL无菌磷酸盐缓冲液。术后5天对大鼠处死取右侧上下神经节及整个延髓,观察CTB-AF555标记部位。(2)将32只大鼠随机分为4组,对照组(n=8)、阿卡西汀组(n=8)、LL-TVNS组(n=8)和LL-TVNS+阿卡西汀组(n=8),然后使用微电极阵列技术观察离体心脏的场电位时限(FPdur)、激动传导速度(ECV)、房颤诱发率(AFIR)及房颤持续时间(AFD)。4.研究结果(1)大鼠心率随刺激耳屏或耳甲的强度和时间改变而下降,但不随刺激耳轮变化。与刺激耳屏相比,刺激耳甲时心率下降得更快。耳屏注射组里,6只大鼠中3只可在孤束核观察到CTB-AF555;耳甲注射组里,6只大鼠中4只可在孤束核观察到CTB-AF555;耳轮注射组里,6只大鼠中5只在脊束核观察到CTB-AF555,未在孤束核及上下神经节找到神经示踪剂。(2)与对照组相比,阿卡西汀组心房和心室的FPdur延长,ECV加快,能明显降低AFIR,缩短AFD。与阿卡西汀组相比,LL-TVNS+阿卡西汀组心房的FPdur延长和ECV加快,心室的FPdur和ECV无明显变化,明显降低AFIR,缩短AFD。5.结论(1)电刺激耳甲和耳屏均可调节心脏迷走神经功能,其机制与刺激耳屏或耳甲的神经信号与心脏的感觉神经信号在下神经节整合后,再进入延髓中枢分析处理有关。(2)阿卡西汀与LL-TVNS联用可增强治疗房颤作用,且不会延长心室肌的复极化时间。