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第一部分:TIM-3可以作为实体性肿瘤病人的潜在预后标志物:系统综述和荟萃分析目的:越来越多的研究证实了 T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3(TIM-3)在多种肿瘤中的重要作用,并提示其和肿瘤病人的预后相关。为了进一步确认TIM-3与实体性肿瘤的关系以及其对于肿瘤病人预后的临床意义,我们进行了这篇荟萃分析。方法:我们搜索了 PubMed,Web of Science,and Embase三大数据库截止至2016年7月的文章,最终纳入符合条件的7项研究。我们首先对纳入的所有研究采用NOS质量评估体系进行了质量分析,然后使用Stata软件对总计869个确诊的实体性肿瘤病人的数据进行meta分析,主要分析了 TIM-3和病人总生存期(OS)之间的关系;此外,我们还分析了 TIM-3和肿瘤临床分期的相关性。结果:1.统计结果显示,TIM-3高表达与病人的总生存期更短是密切相关的(7项研究,HR=1.89,95%CI:1.38-2.57;P<0.001);2.TIM-3高表达和肿瘤临床分期是相关的(3项研究,Ⅲ期/Ⅳ期VS Ⅰ期/Ⅱ期,RR=2.02;95%CI:1.45-2.81;P<0.001)。结论:综上所述,我们的研究高度提示TIM-3可以作为实体肿瘤的一个预后标志物,也可能成为今后潜在的临床治疗靶点。第二部分:TIM-3和CEACAM1的共表达促进结直肠癌病人T细胞耗竭目的:探索结直肠癌病人外周血循环CD8+T细胞和肿瘤浸润的淋巴细胞(TILs)表面TIM-3和CEACAM1的表达,分析其与T细胞耗竭的关系及与肿瘤病人临床特征的相关性。方法:65名确诊的结直肠癌病人和38名健康对照者被纳入研究。流式细胞术检测外周血循环CD8+T细胞和肿瘤浸润的淋巴细胞表面TIM-3和CEACAM1的表达;并分析其与肿瘤病人临床特征的相关性。流式分析不同细胞亚群之间IFN-γ的产量差异,探索TIM-3和CEACAM1与T细胞耗竭的关系。Cox回归模型预测结肠癌发病的危险因素。结果:1.CRC患者比健康对照组外周血循环CD8+T细胞上有更高的TIM-3和CEACAM1的表达;2.TIM-3和CEACAM1在癌组织肿瘤浸润的淋巴细胞上的表达明显高于其配对的癌旁组织,TILs上二者共表达的比例也明显高于癌旁组织;3.CRC进展过程中TIM-3和CEACAM1的共表达是和T细胞耗竭密切相关的;TIM-3+ CEACAM1+ CD8+ T细胞产生的细胞因子IFN-γ是几个亚群中最低的,其功能也是最差的;4.TIM-3和CEACAM1的表达和肿瘤临床分期是密切相关的,可以作为结直肠癌发病的一个独立的危险因素。结论:我们研究组首次提出,TIM-3和CEACAM1的共表达可以介导T细胞耗竭,可以作为结直肠癌预测的分子标记物,存在应用于靶向免疫疗法的临床前景。第三部分:TIM-3和CEACAM1对CD8+T淋巴细胞功能的影响目的:研究TIM-3和CEACAM1对CD8+T淋巴细胞增殖、凋亡、抗炎、抗肿瘤等功能的影响方法:获取人外周血标本,使用Ficoll密度梯度分离法从外周血单细胞悬液中分离提取单个核细胞,对细胞进行流式细胞抗体细胞表面染色,分别标记CD8、TIM-3、CEACAM1。使用流式细胞分选仪获得四群细胞:TIM-3-CEACAM1-;TIM-3-CEACAM1 +;TIM-3+CEACAM1-;TIM-3+CEACAM1 +。CCK8 检测细胞增殖功能,实时定量PCR检测细胞周期相关基因,凋亡相关基因,炎症相关基因,抗肿瘤因子基因等表达水平。结果:1.TIM-3/CEACAM1双阳性的细胞较双阴性的细胞或单阳性的细胞,表达更低的CCND1、CCNE1、CDK4,而 p16、p21、p27 表达无明显差异;2.TIM-3/CEACAM1双阳性的细胞较其它三群细胞的增殖能力更差;3.TIM-3/CEACAM1双阳性的细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-8、IL-17较其他三群细胞更低,而IL-6水平更高;4.TIM-3/CEACAM1双阳性的细胞产抗肿瘤因子TNF-α、IFN-γ的能力较其他三群细胞都减弱;5.凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达水平在TIM-3/CEACAM1双阳性的细胞中都是降低的。结论:TIM-3和CEACAM1能抑制CD8+T淋巴细胞的细胞周期和增殖功能;促进T淋巴细胞凋亡,抑制其产生TNF-α和IFN-γ,从而抑制T细胞对肿瘤细胞的免疫反应,促进肿瘤的发生、发展和转移,可能作为免疫治疗的潜在靶点来开展研究。