壳寡糖诱导交链孢菌细胞凋亡及毒素抑制的研究

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壳寡糖是一种水溶性低聚糖,具有良好的生物兼容性,可生物降解并对人畜无毒,其抑菌活性在植物病害防治、食品防腐以及医疗等方面具有广阔的应用前景。目前对壳寡糖作用机理的研究主要集中于其诱导植物产生抗病性方面,在壳寡糖抑制病原真菌机理方面还报道较少。交链孢菌是侵染范围很广的一种侵染性真菌,在造成危害的同时,产生多种真菌毒素,采后番茄果实可受其侵染而发生黑霉病。本论文首先研究不同浓度的壳寡糖对菌丝生长和孢子萌发的抑制现象,从而确定寡糖对交链孢菌的生物学影响。结果表明,500 μg/mL的壳寡糖抑菌效果最明显,对菌丝生长的抑制率达到55.56%,对孢子萌发的抑制率达到78%。扫描电镜观察不同浓度的壳寡糖对交链孢菌丝和孢子均有破坏作用,处理组菌丝体管状形态模糊,表面粗糙,甚至出现菌丝消融状态。同样处理组孢子破裂,完全变形,出现原生质溢出现象。其次通过对壳寡糖诱导交链孢菌的细胞凋亡过程进行研究,发现壳寡糖对交链孢菌原生质体有致死作用。荧光显微镜观察结果表明,壳寡糖处理组线粒体膜电位下降,ROS水平显著增高。在激光共聚焦显微镜下观察壳寡糖与交链孢菌丝和孢子的结合,发现菌丝体和孢子整体荧光染色较均匀,但是在菌丝隔膜处出现荧光断裂现象,隔膜未被染色,表明壳寡糖可能进入细胞内部与其DNA结合,凝胶阻滞作用验证结果进一步证实了该结论。以体外提取交链孢菌毒素的方法研究壳寡糖与致病毒素的相互作用表明,壳寡糖处理组细胞存活率基本不受影响,而毒素处理组大部分均出现质壁分离现象和死亡现象,且存活率<5%。壳寡糖和毒素共同作用细胞时,细胞形态较饱满,细胞核无皱缩现象,存活率为90%,说明壳寡糖对毒素侵染番茄细胞有一定的抑制作用。最后本论文还研究了壳寡糖对采后番茄贮藏品质的影响,发现壳寡糖可显著降低果实发病率,抑制病斑扩展速度,延缓果实硬度的降低,推迟番茄果实的甜度变化时间,有效保持果实颜色和抗坏血酸的含量,提高了总酚含量,有利于果实口感的改善和良好风味的形成。
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