牛β-酪蛋白基因在小鼠乳腺上皮细胞中的表达及利用同源重组技术对其进行基因敲除的研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lhyhh123
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究旨在检测CSN2质粒两端的调控序列对β-酪蛋白基因表达效率的影响,并对其进行基因敲除操作,构建缺失β-.酪蛋白基因CDS区的CSN2质粒,从而为利用该质粒两端的调控序列,研究新插入基因的表达奠定基础。 首先,进行了小鼠乳腺细胞的原代培养,并对其进行脂质体介导的CSN2质粒转染,然后通过收集细胞进行RT-PCR,检测β-酪蛋白基因在乳腺组织的表达。采用CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的引物,PCR扩增同源臂,然后和筛选基因(Neo基因)连接,利用Red同源重组系统与CSN2质粒进行同源重组,最后又利用抗性基因两端的loxP位点,诱导Cre酶表达,对重组阳性质粒进行了筛选基因的敲除。结果表明:所培养的原代小鼠乳腺上皮细胞的培养,具有上皮细胞特征。用CSN2质粒转染小鼠乳腺上皮细胞,可检测到β-酪蛋白基因的高效表达。利用同源重组技术成功地敲除了β-酪蛋白基因的编码区,获得了缺失β-酪蛋白基因CDS区的CSN2质粒。在实验中还发现敲除1kb和6kb的DNA片断效率相似,而敲除100bp以内的DNA片断效率较低。
其他文献
本论文对梭鲈(Lucioperca lucioperca)的抗逆性和养殖风险进行了相关研究,旨在为梭鲈的推广养殖提供理论依据和技术指导。测定在不同水温条件下,梭鲈夏花鱼种(28.1~29.9mm)的