烹调油烟中PM2.5对胎鼠AECⅡ细胞氧化损伤和内质网凋亡途径的研究

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目的探讨烹调油烟中的PM2.5对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的氧化损伤作用以及NAC对PM2.5致胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的氧化损伤的保护作用。进一步为烹调油烟PM2.5对肺脏的氧化损伤机制提供实验依据。方法用PM2.5采样器采集油烟中的PM2.5细颗粒物作为染毒物质,用DMSO配制成不同浓度染毒液。提取孕18天的ICR母鼠体内胎鼠肺组织,并从胎鼠的肺组织中提取肺泡Ⅱ型上皮细胞作为实验靶细胞。MTT法测定不同浓度烹调油烟PM2.5对AECⅡ存活率的影响,用MDA、SOD、GSH的试剂盒检测颗粒物对细胞的氧化损伤以及NAC抗氧化应激作用。结果1.不同浓度的细颗粒物分别作用于AECⅡ36h,产生了明显的细胞毒性,并呈现一定的剂量-反应关系,NAC干预后,细胞活力上升。2.染毒36h时,与对照组比较25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml组AEC Ⅱ SOD活力均下降,差异有统计学意义(P<0.05),与染毒12.5μg/ml比较,25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml组AEC ⅡSOD活力均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与染毒25μg/ml比较,75μg/ml组和NAC干预组AEC ⅡS OD活力均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,12.5μg/ml、50μg/ml、75μg/ml组AECⅡ M DA含量均上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与25μg/ml组比较,75μg/ml组AEC ⅡM DA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与75μg/ml组比较,NAC组AEC ⅡM DA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,50μg/ml、75μg/mlPM2.5组AECⅡ G SH含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。不同染毒时间各浓度PM2.5染毒组胎鼠AEC Ⅱ GSH含量间比较,差异均无统计学意义。结论烹调油烟PM2.5对胎鼠AECⅡ产生了细胞毒性和氧化损伤作用,抗氧化剂NAC可以拮抗PM2.5对胎鼠AECⅡ的氧化损伤作用。目的探讨烹调油烟中的PM2.5对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(Glucose-Regulated Protein78,GRP78)及内质网凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-12)蛋白量变化的影响,及NAC对细胞凋亡的拮抗作用,进一步认识烹调油烟PM2.5对肺脏的毒理机制提供理论和实验依据。方法采集烹调油烟PM2.5作为染毒物质,配制成不同浓度细胞染毒液。提取孕18天ICR小鼠肺组织中的AECⅡ作为实验靶细胞。Western Blot测定烹调油烟PM2.5对AECⅡ中内质网凋亡途径相关蛋白GRP78,Caspase-12的表达。结果Western-blot结果显示未折叠蛋白反应伴侣蛋白GRP78,Caspase-12在染毒后36h内表达呈动态变化。1.GRP78蛋白条带表达中:与对照组相比,12.5μg/ml、50μg/ml、75μg/ml和75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05);与12.5μg/ml组相比,25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml和75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05);与25μg/ml组相比,50μg/ml、75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量上升,75μg/ml蛋白表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与50μg/ml组相比,75μg/ml和75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05);与75μg/ml组相比,75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05);2.Caspase-12蛋白条带表达中:与对照组相比,25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml和75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05);与12.5μg/ml组相比,25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml和75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05);与25μg/ml组相比,50μg/ml、75μg/ml、75μg/ml+10mmol/LNACPM2.5染毒组蛋白表达量上升,差异均有统计学意义(P<0.05);与50μg/ml组相比,75μg/mlPM2.5染毒组蛋白表达量下降,75μg/ml+10mmol/LNAC蛋白表达量上升,差异均有统计学意义(P<0.05);与75μg/ml组相比,75μg/ml+10mmol/LNAC干预组蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论烹调油烟中PM2.5可以诱导AECⅡ内质网相关蛋白含量的改变,从而诱导细胞凋亡,抗氧化剂NAC对细胞凋亡具有一定的保护作用。
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