随着细胞生物学及分子生物学的研究进展,新的肿瘤治疗途径和靶点不断被发现,新的治疗药物也陆续被开发出来,而天然药物活性成分以其天然自然、毒副作用小、能提高机体免疫力、不易产生耐药性等优势,在肿瘤的预防和治疗方面发挥其独特的优势。和厚朴酚是我国特有的中药厚朴的主要活性成分之一,它具有很多生物活性如抗炎、抗菌、抗焦虑及抑郁和抗氧化等活性,另外,近些年,有许多研究者发现和厚朴酚对多种癌症如肝癌、乳腺癌、前列腺癌和神经胶质瘤等都具有较好的疗效,说明它在抗肿瘤方面具有一定的应用和开发价值。但和厚朴酚作为一种低溶解度高渗透性的药物,在水中的溶解度较低,这严重限制它在机体内的吸收和利用,使其药效不能正常发挥。因此,改善和厚朴酚在水中的溶解度、提高其口服吸收,这对它在抗肿瘤方面的应用与发展具有一定的意义,而且药物制剂的形式不同,其抗肿瘤分子机制上可能也会有差异。因此,本文首先以改善和厚朴酚的溶解度和生物利用度为目的,通过三种增溶方法来制备和厚朴酚的三种水溶性粉体。然后,通过对和厚朴酚的三种水溶性粉体的溶解度和生物利用度进行对比和分析,选取最佳的水溶性粉体,并考察它对肿瘤细胞的抑制作用。主要内容和结果如下:(1)本文通过反溶剂沉淀法成功制备和厚朴酚纳米粉,并对和厚朴酚纳米粉进行了理化表征和体内外的检测。结果显示和厚朴酚纳米粉与和厚朴酚原粉的化学结构相同,没有发生变化,其晶体结构较原粉有所降低,是呈现无定型形态。而且,和厚朴酚纳米粒的溶解度要明显高于和厚朴酚原粉,在人工胃液中约为46.52 mg/ml(和厚朴酚原粉约为0.06mg/ml),在人工肠液中约为60.19mg/ml(和厚朴酚原粉约为0.04mg/ml)。体外释放研究表明和厚朴酚纳米粉的体外释放率要明显高于和厚朴酚原粉,在人工胃液和人工肠液中分别约是和厚朴酚原粉的20.41倍和26.2倍。另外,和厚朴酚纳米粒在大鼠体内的Cmax和AUC(O→T)值要明显高于原粉,约为原粉的7.62和6.52倍。(2)本文通过溶剂挥发法制备出和厚朴酚固体分散体,从而提高了和厚朴酚的溶解度和口服生物利用度。通过溶解度检测,筛选出泊洛沙姆188作为载体材料,并确定了和厚朴酚与泊洛沙姆188的最佳质量比为1:4。通过扫描电镜观察到和厚朴酚固体分散体是呈多孔的块状的,其形貌与原粉的完全不同,并且和厚朴酚与泊洛沙姆188之间可能形成了分子间氢键,并且在固体分散体是以无定型形态存在的。另外,和厚朴酚固体分散体的溶解度要明显高于和厚朴酚原粉,在人工胃液中约为32.43 mg/ml,在人工肠液中约为34.41mg/ml。体外释放研究表明和厚朴酚固体分散体的体外释放率要明显高于和厚朴酚原粉,在人工胃液和人工肠液中分别约是和厚朴酚原粉的28.01倍和18.25倍。另外,体内药动学研究表明,和厚朴酚固体分散体在大鼠体内的Cmax和AUC(O→T)值要明显高于原粉,约为原粉的6.98和4.41倍。(3)本文以羟丙基-β-环糊精为包合材料,通过研磨和共沉淀相结合的方法成功地制备了具有高水溶性的和厚朴酚包合物;首先通过相平衡实验确定了和厚朴酚与羟丙基-β-环糊精以摩尔比1:1形成包合物,得到的包合物的载药量和包封率分别约为13.08±0.26%和89.80±0.97%;理化性质表征的结果显示和厚朴酚与羟丙基-β-环糊精之间可能形成了分子间氢键,并且和厚朴酚在包合物中是以无定型形态存在的。此外,和厚朴酚包合物的溶解度要明显高于和厚朴酚原粉,在人工胃液中约为53.33 mg/mL(和厚朴酚原粉约为0.06 mg/ml),在人工肠液中约为62.22 mg/mL(和厚朴酚原粉约为0.04 mg/ml)。体外释放研究显示和厚朴酚包合物的体外释放率要明显高于和厚朴酚原粉,在人工胃液和人工肠液中分别约是和厚朴酚原粉的48倍和38.76倍;另外,体内药动学研究表明,和厚朴酚包合物在大鼠体内的Cmax和AUC(O-T)显高于原粉,约为原粉的8.12倍和7.05倍。(4)本文对和厚朴酚的三种水溶性粉体在药物含量、溶解度、生物利用度等方面进行了对比与分析,结果显示和厚朴酚包合物相比纳米粉和固体分散体具有更高的溶解度和口服生物利用度,所以它可能具有更好的抗肿瘤效果。(5)本文研究了和厚朴酚包合物体外抗肿瘤(人肝癌HepG2细胞)作用,并初步探讨和厚朴酚包合物在体外对HepG2细胞诱导凋亡作用的可能机制。结果显示:和厚朴酚原粉和和厚朴酚包合物对HepG2细胞均产生明显的生长抑制和凋亡诱导作用,在相同的和厚朴酚浓度及培养条件下,和厚朴酚包合物显示出比和厚朴酚原粉有更强的细胞毒作用。CCK8结果分析:和厚朴酚包合物能强烈抑制HepG2细胞的生长,和厚朴酚包合物组的细胞存活率明显低于同浓度和厚朴酚原粉处理组。FCM结果显示,和厚朴酚包合物能够阻滞HepG2细胞的G0/G1期,并且也可以诱导HepG2细胞的凋亡,并且这种阻滞和诱导凋亡作用要明显强于和厚朴酚原粉;Q-PCR和蛋白免疫印迹的结果显示,和厚朴酚包合物对HepG2细胞Bcl-2和Bcl-xL基因的mRNA及蛋白表达有抑制作用,对p38-MAPK和caspase 3的mRNA及蛋白的表达有促进作用,并呈剂量依耐性。