[目 的]建立从三七工业药渣中提取、纯化三七多糖的方法,对三七多糖各组分的一级结构进行初步解析,并研究NPPN对骨髓抑制小鼠造血功能的保护作用。[方 法]水提醇沉法从三七工业药渣中提取CPPN,大孔吸附树脂AB-8脱色,脱色后CPPN经阴离子交换柱层析及凝胶过滤柱层析进一步纯化。硫酸蒽酮法测定各多糖组分的中性多糖含量,间羟基联苯法测定各多糖组分的酸性多糖含量,HPGPC法测定各多糖组分分子量及分布,并进行纯度鉴定。HPAEC法测定单糖组成,甲基化反应分析多糖键合结构,ATRFT-IR法测定多糖特征基团及糖环类型,SEM分析多糖形貌特征。腹腔注射环磷酰胺诱导小鼠骨髓抑制模型,考察NPPN对骨髓抑制小鼠外周血细胞数,脾指数、胸腺指数的影响。流式细胞术检测骨髓有核细胞凋亡率及细胞周期;双抗体一步夹心ELISA法检测骨髓抑制小鼠血清GM-CSF、TPO、EPO含量,考察NPPN对骨髓抑制小鼠造血功能的保护作用。[结 果]以水提醇沉法从三七工业药渣中提取CPPN,得率为3.49%,大孔吸附树脂AB-8脱色,脱色率为45.26%,多糖保留率为65.58%。DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进一步纯化脱色后CPPN,得到水洗脱组分NPPN,不同浓度NaCl溶液洗脱组分APPNⅠ、APPNⅡ、APPNⅢ,4组洗脱组分得率分别为 5.72%、3.98%、31.57%、20.32%。APPN Ⅱ 经 Sephadex G-75 凝胶过滤层析进一步纯化,得2个组分,APPNⅡ-A和APPNⅡ-B,得率分别为27.20%和58.80%。APPN Ⅲ经Sephadex G-100凝胶过滤层析进一步纯化,得2个组分,APPN Ⅲ-A 和 APPN Ⅲ-B,得率分别为 15.30%和 73.40%。利用硫酸蒽酮法、间羟基联苯法、HPGPC法、HPAEC法、甲基化反应、ATR FT-IR 法和 SEM 对 NPPN、APPNⅠ、APPNⅡ-A、APPNⅡ-B、APPNⅢ-A 和 APPNⅢ-B理化性质及结构进行初步分析,得到以下结果:NPPN为中性多糖,总糖含量为96.40%,数均分子量为29120 Da,重均分子量232500Da,分散系数为7.984;由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖组成,摩尔比为1:4.12:17.04:0.18;NPPN主要以α-吡喃糖苷的形式存在,是分支程度较低的葡聚糖类多糖,且主要以无规则线团链及棒状链的形式存在。主链主要由1,4-Glcp 糖残基构成,同时还包含 T-Glcp,1,4-Manp,1,6-Glcp,1,6-Galp 糖残基,支链由Galp以1→3,4,1→4,6糖苷键连接而成。APPNⅠ为酸性多糖,中性糖含量为80.87%,酸性糖含量为15.02%,总糖含量为95.89%;数均分子量为19720 Da,重均分子量为489900 Da,分散系数为24.85;由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸组成,摩尔比为1:2.53:3.16:0.17:0.38:0.15;APPNⅠ主要以α-吡喃糖苷的形式存在,存在少量呋喃糖苷,是分支程度较低的葡聚糖类多糖,且主要以以无规则线团链和球状的形式存在。主链主要由1,4-Glcp糖残基构成,同时还包含T-Araf,T-Glcp,T-Glc-ACp,1,3-Galp,1,4-Gal-ACp,1,6-Galp 糖残基,支链由Glcp、Galp分别以1→4,6,1→3,6糖苷键连接而成。APPNⅡ-A为酸性多糖,中性糖含量为70.46%,酸性糖含量为20.17%,总糖含量为90.63%;数均分子量为91340 Da,重均分子量为450100 Da,分散系数为4.928;由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸组成;其摩尔比为1:2.99:3.00:0.49:0.18。APPNⅡ-A主要以β-吡喃糖苷的形式存在,存在少量呋喃糖苷,是分支程度较低的葡聚糖类多糖,且主要以扁平球状形式存在。主链主要由 1,4-Glcp 糖残基构成,还包含 T-Araf,T-Glcp,T-Glc-ACp,T-Galp,1,3-Galp,1,4-Galp,1,4-Glcp,1,4-Glc-ACp,1,6-Galp 糖残基,支链由1→3,4-Glcp,1→4,6-Glcp,1→3,6-Galp 糖残基构成。APPN Ⅱ-B为酸性多糖,中性糖含量为6.28%,酸性糖含量为85.34%,总糖含量为91.62%;数均分子量为12510 Da,重均分子量为28600 Da,分散系数为2.287;由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸组成;其摩尔比为1:0.92:1.40:48.97。APPNⅡ-B同时以α-吡喃糖苷和β-吡喃糖苷的形式存在,是分支程度较低的半乳糖醛酸聚糖类果胶,且主要以分支程度较低的无规则带状链的形式存在。主链主要由1,4-Gal-ACp糖残基构成,同时还包含T-Gal-ACp,1,4-Glcp糖残基,支链由Gal-ACp分别以1→3,4,1→4,6糖苷键连接而成。APPN Ⅲ-A为酸性多糖,中性糖含量为39.86%,酸性糖含量为30.69%,总糖含量为70.56%;数均分子量为89430 Da,重均分子量为336100 Da,分散系数为3.758;由岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸组成,摩尔比为0.16:1:3.46:1.46:0.12:0.15:2.18:0.29;主要以β-吡喃糖苷的形式存在,是以分支程度较低的链状和球状形式存在的多糖。APPN Ⅲ-B为酸性多糖,中性糖含量为5.89%,酸性糖含量为77.07%,总糖含量为82.96%;数均分子量为25110Da,重均分子量为56280Da,分散系数为2.241;由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸组成;其摩尔比为1:1.04:1.98:59.80。APPN Ⅲ-B同时以α-吡喃糖苷和β-吡喃糖苷的形式存在,是分支程度较低的半乳糖醛酸聚糖类果胶,且主要以片状的形式存在。主链主要由1,4-Gal-ACp糖残基构成,同时还包含T-Gal-ACp,1,4-Glcp糖残基,支链由Gal-ACp以1→3,4糖苷键构成。NPPN对骨髓抑制小鼠造血功能作用研究结果表明:低、高剂量NPPN可提高骨髓抑制小鼠脾指数(P<0.05或P<0.01),且与地榆升白片,rh G-CSF 比较无统计学差异。高剂量NPPN可使骨髓抑制小鼠红细胞数、血红蛋白浓度、白细胞数和中性粒细胞数增加(P<0.05或P<0.01),且可使骨髓抑制小鼠中性粒细胞数升至正常水平,高剂量NPPN提高外周血中红细胞数、血红蛋白浓度的作用与rh G-CSF相比无统计学差异(P>0.05);低、中、高剂量NPPN可使骨髓抑制小鼠红细胞压积显著升高(P<0.01);中、高剂量NPPN可使骨髓抑制小鼠血小板数量增加(P<0.05),中剂量NPPN提高外周血中血小板数的疗效强于地榆升白片(P<0.05),高剂量NPPN提高外周血中白细胞数及中剂量NPPN升高淋巴细胞数的疗效与地榆升白片比较无统计学差异。低、中、高剂量NPPN可降低骨髓有核细胞凋亡率(P<0.01),中剂量NPPN降低骨髓抑制小鼠骨髓有核细胞凋亡率的作用强于地榆升白片(P<0.05),与rh G-CSF的疗效比较无统计学差异(P>0.05)。低、中、高剂量NPPN能解除骨髓有核细胞细胞周期阻滞,从而促进骨髓有核细胞增殖。同时NPPN还可以升高骨髓抑制小鼠血清GM-CSF、TPO、EPO含量(P<0.05或P<0.01),刺激造血干细胞向红细胞、巨核细胞、粒细胞的分化及成熟。高剂量NPPN升高骨髓抑制小鼠血清GM-CSF含量的作用与地榆升白片相比无明显差异(P>0.05);高剂量NPPN提高骨髓抑制小鼠血清TPO含量的作用与rh G-CSF 比较无统计学差异(P>0.05)。高剂量NPPN提高骨髓抑制小鼠血清EPO含量的作用与地榆升白片及rh G-CSF比较无统计学差异。[结 论]本研究建立了从三七工业药渣中提取纯化三七多糖的方法,以水提醇沉法提取,大孔吸附树脂AB-8脱色,得到CPPN,通过DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化脱色后CPPN,获得中性均一多糖NPPN,酸性多糖APPN Ⅰ,APPN Ⅱ,APPN Ⅲ,分别用 Sephadex G-75 和 Sephadex G-100 凝胶过滤层析进一步纯化APPN Ⅱ和APPN Ⅲ,得到酸性均一多糖APPN Ⅱ-A,APPNⅡ-B,APPNⅢ-A 和 APPNⅢ-B。对 NPPN,APPN Ⅰ,APPN Ⅱ-A,APPN Ⅱ-B,APPN Ⅲ-A 和 APPN Ⅲ-B 结构进行了初步解析,NPPN,APPN Ⅰ 和 APPN Ⅱ-A是以1,4糖苷键为主链的葡聚糖类多糖,APPNⅢ-A为葡聚糖类多糖,APPNⅡ-B和APPN Ⅲ-B是以1,4糖苷键为主链的半乳糖醛酸聚糖类果胶。NPPN通过解除骨髓有核细胞细胞周期S期阻滞,拮抗环磷酰胺所致细胞异常凋亡,提高血清造血生长因子GM-CSF、TPO、EPO含量,促进造血干细胞分化及成熟,提高外周血中红细胞数、血红蛋白浓度、白细胞数、中性粒细胞数、红细胞压积、血小板数,对骨髓抑制小鼠造血功能发挥保护作用。