论文部分内容阅读
目的：利用冠心病心肌梗塞大鼠模型，以及体外培养的大鼠骨髓内皮祖细胞，进行瓜蒌干预冠心病的药效学研究，初步探讨瓜蒌对冠心病内皮祖细胞动员的作用，揭示瓜蒌干预冠心病心肌梗塞的作用及机制。方法：（1）Wister大鼠分为4组：对照组、模型组、丹参组（阳性药对照组）瓜蒌干预组。采用左冠状动脉结扎复制冠心病大鼠模型，TTC法检测心肌的梗死率，半自动生化分析仪测定各组大鼠血浆中CK、CKMB、AST、LDH、α-HBDH等5项心肌酶活性，确定心肌细胞坏死程度,明确瓜蒌对模型大鼠的保护作用。（2）另取一批Wister大鼠，造模大鼠随机分为模型组、对照组、瓜蒌干预组,分别在术后1、2、3、4、5、6、7天处死动物，取外周血，流式细胞仪检测其中CEPC含量，绘制动态变化曲线。（3）提取大鼠骨髓单个核细胞（MNC），M199培养基添加血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）培养7天。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC。以低氧、营养胁迫方法处理培养的大鼠骨髓内皮祖细胞，造成冠心病内皮祖细胞损伤模型；培养液中添加瓜蒌皮注射液培养上述细胞，MTT法检测其增殖能力，酶联免疫(ELISA)检测细胞培养液中的VEGF含量。结果：（1）造模后6h,瓜蒌皮组心肌梗死率、血浆5种心肌酶活性均显著降低(P<0.05或P<0.01)，与丹参片组无显著性差异；表明瓜蒌对冠心病急性心肌缺血模型大鼠具有显著的保护作用。（2）冠心病急性心肌缺血模型大鼠外周血内皮祖细胞（CEPC）含量在1-3天内逐渐升高，第4-7天呈现下降趋势，但仍高于对照组，说明心肌缺血是刺激EPCs动员的重要因素之一；瓜蒌组大鼠外周血内皮祖细胞（CEPC）含量在第1-7天一直呈上升趋势，4-7天高于模型组，表明瓜蒌可能通过增强骨髓EPC的动员而发挥对冠心病的干预作用。（3）MTT实验表明，瓜蒌可增强缺血缺氧状态下EPC的体外增殖能力，且在一定范围内呈浓度依赖性，于50mg/mL时达最大效应；瓜蒌可在一定程度上促进EPCs的VEGF表达。结论：瓜蒌并能够显著降低急性心肌缺血模型大鼠心肌梗死率，减少心肌酶的释放，对大鼠缺血心肌具有明显的保护作用。瓜蒌对大鼠内皮祖细胞动员有明显的干预效果；瓜蒌可明显提高缺血缺氧EPC的体外增殖能力，其机制可能与促进VEGF的表达有关。