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目的:HBV的感染一直是困扰人类的一个问题,现有的手段并不能有效地控制其进展,而近年来对RNA干扰的研究证明其在抗病毒方面也有着巨大的潜力。本实验拟评估长的反义RNA干扰片段在培养细胞株中对HBV复制的抑制效应。方法:(1)将HBV基因组中S编码基因的全部核苷酸序列插入至pTARGET载体中,构建重组质粒HBS2(反向插入序列)和HBS4(正向插入序列),并用这两种质粒转染HepG2.2.15细胞。(2)实验分为HBS2组、HBS4组、干扰素组、聚肌胞组和对照组。(3)ELISA法检测各组细胞上清中病毒抗原表达水平。(4)real time PCR法检测各组细胞内和分泌入培养基的HBV DNA水平及细胞内的HBV cccDNA水平。(5)real time RT-PCR检测各组细胞内β-干扰素mRNA水平。(6)Cellular DNA Fragmentation ELISA测定各组细胞的凋亡率。结果:(1)PCR及测序结果显示HBS2和HBS4质粒构建成功。(2)ELISA结果显示HBS2组、干扰素组、聚肌胞组细胞上清中HBsAg和HBeAg的水平较对照组降低(P<0.05),HBS4组HBsAg水平较对照组升高(P<0.05),HBeAg水平无变化(P>0.05)。(3)real time PCR结果显示HBS2组、干扰素组、聚肌胞组细胞上清中HBV DNA水平和细胞内HBV DNA、HBV cccDNA水平较对照组降低(P<0.05),HBS4组则均与对照组无差异(P>0.05)。(4)real time RT-PCR结果显示HBS2组、聚肌胞组细胞内β-干扰素mRNA水平较对照组升高(P<0.05),HBS4组与对照组无差异(P>0.05)。(5)Cellular DNA Fragmentation ELISA结果显示HBS2组、干扰素组和聚肌胞组细胞凋亡率较对照组升高(P<0.05),HBS4组与对照组无差异(P>0.05)。结论:长片段反义RNA能抑制HepG2.2.15细胞中HBV基因的表达和病毒复制,且能诱导HepG2.2.15细胞的凋亡。